الإزالة الميكانيكية لغشاء المشيمة والفيتيلين: طريقة لتحضير ذبابة الفاكهة للمراقبة المباشرة

- ابدأ بالبويضات الناضجة من المبايض الثابتة في محلول ملحي. تحمل البويضات الناضجة قشر البيض الذي يتكون من مشيمة خارجية وغشاء زجاجي داخلي.

لإزالة غشاء المشيمة والزجاجي ميكانيكيا ، ضع البويضات بين الأجزاء المتجمدة من شريحتين معالجتين مسبقا. حرك الشريحة العلوية بحركات مستقيمة ذهابا وإيابا لخلق احتكاك يلف البويضات.

الآن ، حرك الشريحة العلوية بزاوية طفيفة لدحرجة البويضات في اتجاه آخر. تجنب الحركة الدائرية، قم بزيادة هذه الزاوية بزيادات قصيرة حتى تتحرك الشريحة العلوية بشكل عمودي على الشريحة السفلية. تزيل هذه الحركة ميكانيكيا المشيمات والأغشية الزجاجية ، مما يتيح الوصول إلى المجسات أو البقع في البويضة.

ستظهر البويضات الخالية من المشيمات طويلة ورقيقة ، وتلك التي لا تحتوي على أغشية زجاجية سيكون لها نهايات مدببة. لفصل البويضات التي تم تطهيرها عن الحطام المحيط ، انقل مزيج العينة إلى أنبوب ، واترك البويضات تستقر في الأسفل بينما يطفو الحطام في الأعلى ويمكن إزالته.

في هذا البروتوكول ، سنقوم بإزالة أغشية المشيمة والفيتلين من بويضات ذبابة الفاكهة الناضجة.

- لفصل البويضات في المرحلة المتأخرة ، أضف أولا 1 مليلتر من PBSBTx إلى طبق تشريح ضحل. بعد ذلك ، استخدم P200 بطرف مطلي ب BSA لنقل المبايض الثابتة إلى الطبق الضحل. قم بتمرير المبايض لأعلى ولأسفل باستخدام طرف الماصة المطلي ب BSA لإخراج البويضات الناضج