JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء
0 مشاهدات • 3:56 د • April 30th, 2023
- في الذبابة البالغة ، تكون عضلات الطيران غير المباشرة ، أو IFMs ، أكبر عضلات الذبابة التي تمتد على الصدر بأكمله. تنسق IFMs حركات الأجنحة عالية التردد المميزة في الذباب ذو الجناحين ، بما في ذلك ذبابة الفاكهة. تشتمل مجموعتان متعارضتان من ألياف العضلات على IFMs.
أولا ، تقع العضلات الطولية الظهرية ، أو DLMs ، على طول المستوى المتوسط للصدر فوق القناة الهضمية وتمتد من الأمام إلى الخلف. ثانيا ، تمتد العضلات البطنية الظهرية ، أو DVMs ، من أعلى إلى أسفل الصدر وتحيط بها TDT ، أو عضلة القفز. ترتبط كلتا مجموعتي العضلات بالبشرة.
بعد حوالي 48 ساعة من تكوين الشرانق ، أو APF ، يمكن التعرف على IFMs الناضجة بصريا باستخدام مجهر تشريح بسيط. في مثال البروتوكول ، سنقوم بجمع IFMs من الشرانق التي يزيد عمرها عن 48 ساعة APF لتحليل الإنتاجية العالية.
- لتشريح IFM بعد 48 ساعة من APF ، استخدم فرشاة طلاء مبللة قليلا لنقل الشرانق المرحلية إلى شريط من الشريط اللاصق على الوجهين مثبت على شريحة مجهرية. قم بتوجيه الشرانق في خط ، والجانب البطني لأسفل ، والأمامي باتجاه أسفل الشريحة. عندما يتم وضع كل الشرانق ، استخدم الملقط لفصل وفتح حالة العذراء الأولى فوق الفتحات التنفسية الأمامية ، وحرك زوجا من الملقط برفق ظهريا باتجاه الخلف ، مع قطع حالة العذراء أثناء تحرك الملقط.
حرر الخادرة من العلبة المفتوحة ، وانقل الخادرة على الفور إلى قطرة من PBS على شريحة مجهرية ثانية. عندما يتم تحرير جميع الشرانق ، استخدم مقصا دقيقا لقطع بطن الشرانق بعيدا عن الصدر ودفع البطن إلى كومة منفصلة. عندما تتم إزالة جميع الصدر ، استخدم قطعة من المناديل الورقية لإزالة غالبية PBS وكومة البطن.
أضف قطرة من PBS الطازج المبرد إلى الصدر المتبقي قبل استخدام المقص للقطع من الرأس على طول محور الجسم الطولي بحركة واحدة لتقسيم الصدر إلى نصفين. عندما يتم تشريح جميع الشرانق ، استخدم الملقط الخامس لتحديد أحد الأقسام النصفية وأدخل أطراف ملقط واحد برفق أعلى وأسفل منتصف IFMs.
أمسك الزوج الأول من الملقط ، استخدم مقصا دقيقا لقطع أحد طرفي IFM بعيدا عن البشرة والأوتار قبل تدوير الخادرة 180 درجة للسماح بقطع الطرف الآخر من IFM من البشرة والأوتار. استخدم الملقط لنقل حزمة IFM من الصدر إلى حافة فقاعة PBS باستخدام شد الماء لتثبيت الحزمة في مكانها.
بعد ذلك ، ادفع الذبيحة إلى الجانب الآخر من الشريحة وقم بتشريح بقية IFMs بنفس الطريقة. عندما يتم جمع جميع IFMs ، استخدم الملقط رقم خمسة لإزالة أي عضلة قفزة أو شظايا بشرة ربما وجدت طريقها إلى العينات. بعد ذلك ، استخدم شد الماء لالتقاط IFMs التي تم تشريحها برفق بين زوج من الملقط ووضع IFMs في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل يحتوي على 250 ميكرولتر من PBS المبرد.