دودة واحدة PCR: طريقة لاستخراج وتضخيم الحمض النووي الجيني

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأحياء

0 مشاهدات • 2:44 د • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل للدودة المفردة ، اسمح لدودة خنثى بالتخصيب الذاتي ووضع البيض الذي سينتج ذرية متطابقة وراثيا ، وبالتالي الحفاظ على نسخة من السلالة المعدلة. ثم انقل الوالد إلى أنبوب يحتوي على مخزن مؤقت لتحلل الدودة.

قم بتجميد الأنبوب عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لفتح البشرة أو الطبقة الخارجية. قم بتسخين العينة إلى زائد 60 درجة مئوية لتحلل الخلايا الدودية التي تطلق البروتينات داخل الخلايا جنبا إلى جنب مع الحمض النووي الجيني للخلية. عند درجة الحرارة هذه ، يؤدي البروتيناز K داخل المخزن المؤقت إلى تحلل البروتينات ، وخاصة نوكليازات التي من شأنها أن تدمر الحمض النووي الجيني.

ثم ارفع درجة الحرارة إلى 95 درجة مئوية لتعطيل الإنزيم. أخيرا ، أضف محللة الخلية إلى أنبوب به مزيج رئيسي من تفاعل البوليميراز المتسلسل يتكون من مخزن مؤقت للتفاعل ، و dNTPs ، والبادئات الأمامية والخلفية للمنطقة ذات الأهمية ، وبوليميراز taq ، والماء لجلب التفاعل إلى الحجم النهائي المطلوب. لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل ، قم بتشغيل برنامج التدوير الحراري المناسب الذي يضخم منطقة الحمض النووي ذات الاهتمام.

في المثال التالي ، سنرى إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن أحداث تحرير CRISPR-Cas9 في الحمض النووي الجيني لديدان F1 الفردية.

- بعد 1 إلى 2 أيام من وضع البيض ، استخدم صورة دودة لنقل F1s إلى أغطية أنبوب شريطية فردية PCR تحتوي على 7 ميكرولتر من محلول التحلل الدافئ. جهاز الطرد المركزي لأنابيب PCR بأقصى سرعة ودرجة حرارة الغرفة لمدة دقيقة واحدة لإحضار إلى قاع الأنبوب. ثم قم بتجميد الأنابيب عند سالب 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة.

بعد ذلك ، قم بتحلل الديدان المجمدة في جهاز تدوير حراري باستخدام البرنامج التالي. بعد ذلك، قم بإعداد مزيج PCR الرئيسي كما هو موضح في هذا الجدول.

أضف 21 ميكرولترا من مزيج PCR الرئيسي في أنابيب PCR النظيفة. ثم أضف 4 ميكرولترات من أنبوب تحلل الدودة واخلطه جيدا عن طريق سحب العينات.

بعد ذلك، قم بتشغيل برنامج PCR باتباع إرشادات الشركة المصنعة.

10:27

تحديد ملامح التعبير الجيني في C. ايليجانس استخدام ميكروأري وPCR الوقت الحقيقي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:40

جيل من الجينوم الحذف في خطوط خلايا الثدييات عبر كريسبر / Cas9

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:51

علم البصريات الوراثي الطفرات عشوائية عن طريق هيستون-miniSOG في C. ايليجانس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:40

عينات الشعر نونينفاسيفي تقنيات الحمض النووي للحصول على ارتفاع الجودة من الثدييات الصغيرة المراوغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:37

الحمض النووي الريبي في وقت واحد استخراج من الرواسب الساحلية والكمي ل16S الجينات الريباسي والنصوص التي في الوقت الحقيقي PCR

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:55

استكشاف ميكروبيومي الجذر: استخراج البيانات المجتمع البكتيرية من التربة، ورهيزوسفيري، واندوسفيري الجذر

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:40

اتباع نهج موائع جزيئية المستندة إلى الحبرية والتضخيم ميكروسفيري-بكر للحمض النووي واحد-الذين تقطعت بهم السبل أمبليكونس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:19

عالية الإنتاجية الكمية RT-PCR في عينات C. c.

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:39

شاشة القامع لتوصيف الروابط الوراثية التي تنظم العمر الزمني في Saccharomyces cerevisiae

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:57

التشريح المجهري بالليزر لتطبيقات الأنسجة الأحادية التي لا تعرف الأنواع

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026