موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 4:51 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بالديدان المحببة المغسولة وأضف المخزن المؤقت للتحلل الذي يحتوي على SDS ، ومنظف ، و DTT ، وهو عامل اختزال. يؤدي هذا إلى تكسير بشرة الدودة الواقية مما يعرض الجسم لتفكك الخلايا. تجنب التعرض لفترات طويلة لمخزن التحلل لتقليل تحلل الخلايا وموتها.
بعد ذلك ، قم بإزالة كواشف التحلل بعدة غسلات من عازلة العزل البارد. من المهم أن يكون هذا المخزن المؤقت من الأسمولية الصحيحة لمنع موت الخلايا. استخدم إنزيم البروتياز لتحطيم اتصالات الخلية بالخلايا. ساعد في عملية التجانس جنبا إلى جنب مع الطاقة الميكانيكية عن طريق سحب الخليط على جدار الأنبوب.
أضف وسائط تحتوي على مصل لوقف تفاعل الإنزيم والمضادات الحيوية لمنع التلوث. بيليه وغسل العينة عدة مرات لإزالة معظم الحطام.
أخيرا ، ضع الأنبوب على الجليد للسماح بترسيب الجاذبية. سوف يستقر الحطام بما في ذلك بقايا البشرة أو كتل الخلايا ، بينما تظل الخلايا المنفصلة معلقة في الطبقة العليا من الوسائط. يمكن استخدام هذه الخلايا للزراعة قصيرة المدى أو لعزل مجموعات خلايا معينة عن طريق FACS أو الترسيب المناعي.
في مثال البروتوكول ، سنقوم بفصل الديدان المعدلة وراثيا التي تعبر عن GFP في الخلايا العصبية ذات الأهمية لعزل تلك الخلايا وتحليلها.
- بعد جمع ، قم بطردها بمعدل 1,600 مرة جم لمدة خمس دقائق. قم بإزالة كل المادة الطافية وأعد تعليق الديدان في 1 مليلتر من وسائط M9. ان
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية