فحص الشلل الناجم عن السباحة (SWIP): طريقة لتحديد الحركة بوساطة الدوبامين في C. ايليجانس

- لإجراء الشلل الناجم عن السباحة ، أو اختبار SWIP ، انقل L4 المرحلي C. ايليجانس يرقات إلى صفيحة زجاجية مملوءة بالسائل. تعرف على خنثى L4 من خلال وجود الفرج النامي. رقعة على شكل نصف قمر في منتصف الجسم ، وذيل يشبه السوط.

لتقييم السباحة بوساطة الدوبامين ، سجل حركة الدودة التي تتميز بانحناء الجسم على شكل حرف C وسلوك الضرب. عادة ، تطلق الخلايا العصبية الدوبامين الدوبامين في الشق المشبكي ، والذي بدوره يربط مستقبلات الدوبامين على الخلية المستقبلة.

بمجرد تمرير الرسالة ، يتم إطلاق الدوبامين من المستقبلات ، ويمكن أن تمتص الخلايا العصبية الدوبامينية الناقلات العصبية غير المرتبطة من خلال بروتينات النقل المتخصصة وإعادة استخدامها.

في اليرقات ذات إشارات الدوبامين المتغيرة ، الناتجة عن تعطيل الطفرات في ناقل الدوبامين أو العلاجات الدوائية التي تزيد من إفراز الدوبامين ، يتراكم الدوبامين في الشق المتشابك. يحفز الدوبامين الزائد مستقبلات الدوبامين ، مما يتداخل مع البرنامج الحركي ويترك اليرقات مشلولة. سوف تغرق اليرقات غير القادرة على الحركة في قاع اللوحة.

في مثال البروتوكول ، سنرى عروضا توضيحية مفصلة لمقايسات SWIP اليدوية والآلية في C. ايليجانس المعالجة بالأمفيتامين.

- للتقييم اليدوي ل SWIP ، أضف 40 ميكرولتر من محلول التحكم مع أو بدون أمفيتامين 0.5 مللي مولار في صفيحة موضعية زجاجية. تحت المجسم ، اختر من 8 إلى 10 ديدان متأخرة من المرحلة L4 باستخدام معول رمش ، واغمر المعول في البئر الذي يحتوي على المحلول حتى تتحرك الديدان من المعول وتسبح في المحلول.

ابدأ المؤقت. لاحظ عدد الديدان التي تم إطلاقها في البئر ، ولاحظ وسجل عدد الديدان التي تظهر SWIP في كل علامة دقيقة لمدة 10 دقائق.

في نهاية الإجراء ، انسخ البيانات الأولية في جدول بيانات واحسب النسبة المئوية للديدان المشلولة بقسمة عدد الديدان المشلولة في كل دقيقة على العدد الإجمالي للديدان التي تم اختبارها خلال الفحص وضربها في 100. انسخ قيم النسبة المئوية إلى أي برنامج رسوم بيانية وإحصائية وارسم البيانات بقيم النسبة المئوية ل SWIP على المحور y والوقت على المحور x باستخدام تنسيق الرسم البياني xy.

يمكن إجراء التحليل الإحصائي بين المجموعات المراقبة والمعالجة بالأمفيتامين ووقت العلاج. على سبيل المثال ، باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه والتحليل اللاحق.

للتحليل الآلي للشلل الناجم عن السباحة ، قم بإعداد الكاميرا وبرنامج تعقب الدودة والبرنامج النصي لتشغيل تحليل برنامج التتبع. واستخدم معول رمش لوضع دودة L4 واحدة في مرحلة متأخرة في صفيحة موضعية زجاجية كما هو موضح سابقا.

بعد ذلك ، قم بتسجيل مقاطع فيديو للسباحة لدودة واحدة في كل مرة ، واستخدم برنامج تعقب الدودة لحساب وتيرة انحناءات الجسم. باتباع البرنامج النصي المقدم مع برنامج التتبع للحصول على تردد سحق الدودة وإنشاء خرائط حرارية من بيانات سحق الدودة.