موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:15 دقيقة • April 30th, 2023
- للبدء ، أضف الكربينسيلين و IPTG واحد مليمولار للتحكم في قوارير الثقافة التي تحتوي على الوسائط القاعدية S واختبارها. قم بتدوير أنبوب يحتوي على يرقات في مرحلة النمو الأولى ، وتسمى أيضا يرقات L1 ، لبضع دقائق. الآن قم بإزالة المادة الطافية وضع ميكرولترين من L1s على طبق أجار. ضع اللوحة تحت مجهر تشريح واحسب عدد اليرقات.
أضف بكتيريا RNAi التي تحمل بلازميد RNAi غير محدد إلى قارورة التحكم والبكتيريا ذات الحمض النووي الريبي الذي يستهدف الجينات إلى قارورة الاختبار. يجب أن تكون كمية البكتيريا المضافة متناسبة مع عدد الديدان.
دع اليرقات تنمو مع الاهتزاز المستمر لضمان الأكسجين المناسب. تتغذى اليرقات على البكتيريا. داخل اليرقة ، يرتبط الحمض النووي الريبي الصغير المتداخل بالحمض النووي الريبي المرسال التكميلي الذي ينتجه الجين المستهدف ويمنع التعبير عن البروتين. أخيرا ، افحص الديدان بحثا عن النمط الظاهري الذي تهمك.
في مثال البروتوكول ، سنعالج يرقات L1 باستخدام RNAi الذي يستهدف جين daf-2 ، في الثقافة السائلة.
- لبدء العلاج ، أضف 207.45 مل من الوسائط القاعدية S مع كواشف إضافية كما هو موضح في بروتوكول النص المصاحب إلى قارورة ثقافة Fernbach سعة 2,800 مل. أضف تركيزا نهائيا قدره 50 ميكروغراما لكل مليلتر من الكاربينسيلين و 1 ملليمولار من IPTG ، وأغلق القارورة بغطاء لولبي غشائي
أخرج L1s من حاضنة 25 درجة مئ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية