ذبابة الفاكهة فحص المتاهة Y: طريقة لتقييم الاستجابات الشمية في الذباب

- تتكون المتاهة Y من موصل على شكل حرف Y مع ثلاث قوارير ذبابة متصلة به بواسطة أنابيب مستقيمة أو مدببة. يتحرك الذباب عبر المتاهة باتجاه الجانب مع الحافز الذي يفضلونه. لبدء التجربة ، ضع مناديل ورقية تحتوي على محلول يحتوي على المواد الكيميائية المتطايرة في كل قارورة. ثم قم بتوصيلها بالأنابيب المدببة. تحد الأنابيب المدببة من قدرة الذباب على العودة إلى مركز المتاهة وتبطئ انتشار المواد الكيميائية المتطايرة.

بعد ذلك ، قم بتبريد الذباب الجائع لإبطائه. لا تستخدم التخدير الكيميائي ، فقد يؤثر ذلك على نتيجة الفحص. قم بتوصيل القارورة بسرعة بالذباب المبرد بالجانب الأخير من المتاهة. اترك الذباب لاستكشاف المتاهة. لتقليل أي تفضيل ناتج عن الضوء الساطع ، قم بتنفيذ هذه الخطوة تحت الضوء الأحمر البعيد ، الذي لا يراه الذباب. أخيرا ، عد الذباب على كل جانب من المتاهة. يشير موقعهم في المتاهة إلى تفضيلهم لتلك الرائحة الكيميائية المتطايرة.

في مثال البروتوكول ، سنرى إعدادا لمقايسة المتاهة Y مع ذبابة الفاكهة من النوع البري.

- قبل إجراء الفحص في صباح اليوم التالي ، في نهاية اليوم ، قم بنقل مجموعات من 10 إلى 20 خطا تجريبيا إلى قوارير زجاجية مع رطوبة يتم توفيرها من منشفة مبللة. يجب اختبار الذباب في غضون 16 إلى 18 ساعة ، وإلا فقد يموت بسبب الجفاف أو الجوع. في اليوم التالي ، قم بتجميع متاهة Y. ابدأ بربط الموصل على شكل حرف Y بقارورتين زجاجيتين باستخدام موصلات إسفنجية مع أطراف ماصة مشذبة تصنع القنوات. شكلها المستدق يجعل هذه الممرات أحادية الاتجاه.

يتم توصيل الفرع الثالث من "Y" بأنبوب تحميل ، مصنوع من جزء كبير من طرف الماصة ، ويسمح بالمرور من قارورة التحميل إلى نقطة اختيار المتاهة. خلف كل نفق مستدقة توجد قارورة زجاجية ، يجب تحميل إحداها برائحة كريهة. قم بتحميلها على شكل جرعات سعة 40 ميكرولتر مبللة في مربعات 28 ملم من المناديل الورقية. أي من الاثنين يحتوي على الرائحة يجب أن يتناوب بشكل عشوائي.

لإجراء الاختبار ، قم أولا بتبريد الذباب على الجليد لفترة وجيزة ، حتى يتباطأ الذباب. يجب أن يكون هذا تحت الضوء الأحمر البعيد من مصابيح LED وعند 25 درجة مئوية. قم بإسقاط مجموعة الذباب برفق في قارورة التحميل وقم بتحميل متاهة Y بذباب الاختبار. لا تستخدم التخدير بالغاز.

- من الأهمية بمكان حقا نقل الذباب إلى قارورة التحميل بسرعة وبلطف. إنها في الواقع أصعب خطوة في هذه التجربة لأن الذباب يجب أن يستيقظ بسرعة قبل انتشار الروائح في متاهة Y.

- يجب السماح للذباب باستكشاف المتاهة لمدة 24 ساعة ، بحيث ينتقل الحد الأقصى لعدد الذباب إلى قارورة زجاجية أو أخرى. يعمل عدد الذباب الموجود في الأنابيب المختلفة على حساب مؤشر حاسة الشم. يجب تطبيق الطرق الإحصائية القياسية على هذه القيمة ، التي تم جمعها من سلوك ما يصل إلى 10 ذباب.

إذا كانت الأفواج المكونة من 10 ذبابة لا تقدم نتائج متسقة ، فيمكن إجراء التجارب مع 20 مجموعة من الذبابة. لتنظيف مكونات المتاهة ، انقعها وتفكيكها في RBS 35 MD بين عشية وضحاها. اتبع ذلك بالشطف بماء الصنبور والشطف النهائي بماء DI قبل التجفيف بالهواء.