JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء
0 مشاهدات • 2:38 د • April 30th, 2023
- لتحضير يرقات ذبابة الفاكهة لمقايسة المسبار الحراري ، اجمع في مرحلة النمو المرغوبة ، وانقل اليرقات المفردة إلى لوحة اختبار بطبقة رقيقة من الماء. يسمح الماء لليرقات بالتحرك بحرية دون الالتصاق بسطح اللوحة.
تكتشف يرقات ذبابة الفاكهة المحفزات الحرارية الضارة من خلال الخلايا العصبية الحسية متعددة التصحنات في بشرتها المعروفة باسم مستقبلات الألم. لا يتم إطلاق هذه حتى يتم الوصول إلى عتبة حسية معينة ، مثل درجات الحرارة المرتفعة التي يحتمل أن تكون ضارة.
اضبط المسبار الحراري على درجة حرارة تتغلب على هذه العتبة الحسية ، وتتسبب في إطلاق مستقبلات الألم. اضغط برفق على طرف المسبار على اليرقة لتطبيق الحرارة. سوف تستجيب اليرقة لدرجة الحرارة الضارة بسلوكيات تحمل الألم الحراري ، وتنسحب من المسبار. توقف عندما تظهر اليرقة دورا بزاوية 360 درجة بعيدا عن المسبار الحراري ، أو عند انقضاء وقت محدد. سجل وقت الاستجابة.
في مثال البروتوكول ، سنرى عرضا توضيحيا لمقايسة مسبار حراري موضعي على يرقات ذبابة الفاكهة في أوائل الطور الثالث.
- أولا ، اضبط درجة حرارة المسبار الحراري مسبقا على نقطة الضبط المطلوبة. استخدم فرشاة رسم أو ملقط لنقل يرقة فردية برفق إلى منصة مسطحة ، مما يضمن تغطية الحمم البركانية بغشاء رقيق من الماء.
- من أجل تقليل التباين في الضغط ، وكذلك لضمان الموقع الصحيح وزاوية المسبار الحراري ، فإن الممارسة تجعلها مثالية.
- اضغط برفق على طرف المسبار على اليرقة في الجزء A4 ، مع الضغط الخفيف مع الطرف بزاوية 45 درجة تقريبا بين المسبار وسطح اليرقة. يجب أن يتسبب الضغط في حدوث فجوة طفيفة على سطح اليرقة ، وعادة ما يكون كافيا لمنع الحركة. استمر في تحفيز اليرقة حتى تظهر استجابة الانسحاب أو حتى يتم الوصول إلى الحد الأقصى لمدة 20 ثانية.
عادة ما تظهر اليرقات المستجيبة أولا سلوكا أوليا لرفع الرأس والذيل ، يليه سلوك الانسحاب المتمثل في التدحرج بزاوية 360 درجة على الأقل. بمجرد بدء سلوك السحب ، حرر الاتصال بالمسبار ، وسجل زمن الوصول أو الوقت المستغرق للانسحاب. إذا لم يلاحظ أي سلوك انسحاب في غضون 20 ثانية ، فإن اليرقة غير مستجيبة.