مقايسة تدرج درجة الحرارة: طريقة لاختبار تفضيل درجة الحرارة في ذبابة الفاكهة يرقات

- لاختبار تفضيل درجة حرارة ذبابة الفاكهة يرقات ، قم بإنشاء تدرج درجة حرارة عن طريق تسخين جانب واحد من لوحة فحص الألومنيوم وتبريد الجانب الآخر. يتميز الألمنيوم بموصلية حرارية عالية ، مما يعني أن الحرارة تنتقل بكفاءة ، مما يخلق تدرجا خطيا ثابتا في درجة الحرارة. بعد أن يتوازن النظام ، سجل درجات الحرارة عبر اللوحة في مناطق درجة حرارة متساوية الحجم ، ثم قم بتحميل مركز اللوحة باليرقات النظيفة.

قم بتغطية النظام بالكامل للتخلص من التداخل من الضوء الساطع وبدء التجربة. تنتشر اليرقات من خلال التدرج ، وتجنب المناطق المكروهة الدافئة جدا أو شديدة البرودة ، وتستقر في مناطق ذات درجات حرارة مواتية. هذا السلوك يسمى thermotaxis. لتقييم تفضيل درجة حرارة اليرقات ، سجل عدد في كل منطقة درجة حرارة.

في مثال البروتوكول، سنرى كيفية إعداد تدرج درجة حرارة أحادي الاتجاه بين 18 و28 درجة سلزية، وكيفية التعامل مع اليرقات أثناء المقايس.

- لإعداد تدرج أحادي الاتجاه ، أولا ، قم بإنشاء بيئة محيطة رطبة للمقايس. ضع كتلتين من الألومنيوم متصلتين بحمامات مائية منفصلة على مناشف ورقية مبللة على بعد 10 سم. يجب تسخين الحمامات المائية مسبقا. بعد ذلك ، اصنع 100 مل من 1٪ agarose وأضف 25 مل إلى كل لوحة فحص على سطح مستو. بمجرد أن يصلب الاغاروز ، افركي السطح برفق بإسفنجة من الميلامين لجعل السطح خشنا قليلا.

بعد ذلك ، لتعزيز نقل درجة الحرارة بكفاءة ، املأ أي فجوات بين كتل الألمنيوم في ألواح الفحص بالماء الذي يتم توصيله من زجاجة رذاذ. الآن ، ضع لوحات الفحص على كتل الألمنيوم وتأكد من أن الترسيم 2 سم من أي من الحواف لتتناسب تماما مع حواف كتل الألومنيوم.

بعد ذلك ، رش طبقة من الماء على سطح الألواح حتى لا تجف المواد الهلامية. بعد ذلك ، قم بتغطية النظام بصندوق من الورق المقوى لتقليل التبخر والمساعدة في استقرار درجة حرارة سطح الجل. انتظر لمدة 5 إلى 10 دقائق للسماح لدرجة الحرارة بالتوازن. بعد ذلك ، تحقق من درجة حرارة السطح على اللوحة في 12 موقعا على الأقل للتأكد من وجود درجة حرارة متساوية في جميع الأنحاء ، أعط أو خذ 2 درجة مئوية. ثم استبدل غطاء الصندوق حتى يتم إجراء الفحص.

أولا ، قم بإزالة صندوق الورق المقوى فوق الجل وتحقق بسرعة من درجة حرارة سطح الجل. إذا كان السطح جافا ، رش كمية صغيرة من الماء على السطح. إذا كان الجل جيدا ، فقم بتحميل 100 إلى 200 يرقة في وسط كل لوحة باستخدام فرشاة رسم صغيرة. بعد ذلك ، ضع غطاءا فوق كل لوحة فحص لاحتجاز اليرقات وقم بتغطية الإعداد بصندوق من الورق المقوى لمنع التعرض للضوء. الاختبار قيد التنفيذ الآن.

بعد 10 إلى 30 دقيقة ، قم بإزالة صندوق الورق المقوى وغطاء الصفيحة الدقيقة. ثم قم بتصوير الصفائح من الأعلى لتسجيل موضع اليرقات. ضع الصندوق فوق الكاميرا لتجنب الانعكاس على سطح الجل. لتنظيف اللوحة ، استنشق كل اليرقات أينما كانت متناثرة.

الآن ، احسب النسبة المئوية لتوزيع اليرقات في كل منطقة باستخدام برنامج تحليل الصور. اصنع خطوطا كل 2 سم بناء على الترسيم على لوحة الفحص واحسب عدد اليرقات في كل منطقة.

- عند العد ، تجاهل اليرقات الموزعة في مناطق 0.5 سم من كل حافة. سمك الجل وظروف درجة الحرارة ليست موحدة بالقرب من الحافة.