تحليل العمر: قياس C. ايليجانس طول العمر

- لقياس متوسط العمر الافتراضي لمجموعة الديدان الخيطية ، ابدأ بيرقات L1 المتزامنة نمويا في المخزن المؤقت M9. حدد كثافة اليرقات ، ثم أضف 50 إلى كل لوحة. قم بإعداد ما لا يقل عن ثلاث لوحات مكررة لكل حالة ، بالإضافة إلى لوحات احتياطية.

اسمح لهذه الديدان بالتطور بشكل طبيعي حتى تصل إلى المرحلة L4. يمكنك الآن إضافة FUdR إلى الألواح ، مما يمنع الديدان من إنتاج ذرية. بدلا من ذلك ، ستحتاج إلى نقل الديدان إلى ألواح جديدة كل يوم بعد العد ، للتأكد من أنك تقيس عمر جيل واحد فقط.

بعد ذلك ، قم بإزالة أي ذكور. سيؤدي ذلك إلى إزالة متغيرات الجنس والتزاوج من التجربة. في اليوم التالي ، احسب عدد الديدان الحية على اللوحة من خلال البحث عن حركة عفوية أو استجابة للمس لطيف. قم بإزالة أي ديدان ميتة وسجل الأرقام. عد الديدان الباقية يوميا حتى لا تبقى أي منها. في مثال البروتوكول ، سنرى عرضا توضيحيا لمقايسة العمر الافتراضي.

- قم بتحميل الألواح المحضرة ببذور البكتيريا ب 50 L1 لكل منها. قم بإعداد الصفائح في حاضنة 20 درجة مئوية حتى تتطور الأجنة إلى المرحلة L4. يستغرق التطور الطبيعي من L1 إلى L4 حوالي 40 ساعة.

بعد ذلك ، لمنع إنتاج النسل ، أضف 160 ميكرولترا من 50x FUdR إلى كل لوحة. ثم قم بإزالة الذكور ، حيث يتم قياس العمر عادة فقط باستخدام الخنثى. بمجرد الانتهاء ، أعد تعبئة الأطباق في حاضنة 20 درجة مئوية.

حتى تموت جميع الديدان ، سجل قدرتها على البقاء على أساس يومي. للقيام بذلك ، المس برفق كل ديدان خيطية غير متحركة على الرأس بسلك بلاتيني أو رمش. غير المتفاعلة ميتة ويجب إزالتها من اللوحة. لاحظ أي حالات شاذة خلال هذا الروتين.