موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 2:56 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بإعداد المركب لاختباره بحثا عن السمية ، ووزعه على آبار لوحة الفحص. انقل الديدان في مرحلة النمو المناسبة إلى كل بئر ، وابدأ على الفور في المؤقت. لاحظ أي ديدان تالفة ولا تدرجها في حسابات البقاء على قيد الحياة.
بعد وقت محدد مسبقا ، احسب عدد الديدان التي لا تزال حية في كل بئر. يجب أن يتسبب الضوء الساطع لمجهر التشريح أو النقر اللطيف على اللوحة في تحرك أي ديدان حية. كرر هذه الملاحظة بعد كل فاصل زمني ، حتى تموت معظم. في البروتوكول التالي ، سنلاحظ وقت بقاء يرقات L4 أثناء التعرض للباراكوات ، وهو مركب يحفز الإجهاد التأكسدي.
- في هذا العرض التوضيحي ، سيتم تحفيز الإجهاد التأكسدي باستخدام الباراكوات. قم بإعداد محلول باراكوات جديد 100 مللي مولار كما هو موضح في نص البروتوكول المصاحب. الباراكوات مركب خطير وشديد السمية ، ويجب التعامل معه وفقا للإرشادات المناسبة.
ماصة 40 ميكرولتر من محلول الباراكوات لكل بئر من صفيحة 96 بئر. استخدم ما لا يقل عن 12 بئرا كتكرار لكل حالة تم اختبارها. باستخدام معول دودة الأسلاك البلاتينية ، انقل خمسة إلى ثمانية يرقات L4 إلى كل بئر.
حدد وقت البدء ووقت الانتهاء لكل حالة تم اختبارها. ضع الطبق المكون من 96 بئرا على حرارة 20 درجة مئوية. بعد ساعة من وقت البدء ، قم بتسجيل الميتة والحية باستخدام مجهر تشريح. رج الطبق برفق قبل البدء في العد.
يتمتسجيل الديدان التي لا تتحرك حتى بعد اكتشاف ضوء عالي الكثافة على أنها ميتة. انظر إلى شكل الدودة وذيولها وحركة الرأس بتكبير عال لتمييز الديدان الميتة عن الديدان الحية. سجل البقاء على قيد الحياة كل ساعة حتى تموت معظم الديدان ، وكرر هذا الاختبار ثلاث مرات مستقلة على الأقل.
لتحديد النسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة لكل نقطة زمنية ، احسب أولا العدد الإجمالي للحيوانات لكل حالة عن طريق إضافة العدد الإجمالي للحيوانات المنقولة إلى كل بئر. تجاهل التي تضررت أو قتلت عند النقل. بعد ذلك ، لكل نقطة زمنية ، احسب العدد الإجمالي للحيوانات النافقة لكل حالة. احسب نسبة الوفاة ونسبة البقاء على قيد الحياة.