ج. ايليجانس تشريح الأريمة: طريقة لإزالة قشر البيض وفصل الخلايا الجنينية

- لهذا التشريح ، استخدم ماصتين دقيقتين: إحداهما بفتحة بنفس عرض البيضة تقريبا والأخرى ضعف عرضها ، وسلسلة من المحاليل المنظمة في الآبار لتسهيل النقل السريع بينهما.

أولا ، ضع الخنثى البالغة في محلول ملح البيض ، وهو متوازن تناضحيا لمنع الأجنة من الانفجار. اقطع الديدان إلى نصفين لتحرير الأجنة النامية.

ثم حدد الأجنة المكونة من خليتين. هذه الخلايا هي الأريمة التي تتكون من انقسام البويضة المخصبة. استخدم الماصة الدقيقة ذات الفتحة الأكبر لنقل الجنين إلى محلول هيبوكلوريت ، المبيض ، والذي سيبدأ في تكسير قشر البيض الواقي.

بعد 40 إلى 55 ثانية فقط ، انقل الجنين إلى وسط نمو شيلتون ، أو SGM. اغسل كل جنين لفترة وجيزة في بئرين من SGM لإزالة جميع آثار المبيض قبل وضعها في بئر ثالث.

الآن ، استخدم الماصة الدقيقة الأصغر لماصة الجنين بشكل متكرر مما يوفر القوة الميكانيكية لإزالة قشر البيض وفضح الأريمة. استمر في ماصة الجنين برفق لفصل خلايا الأريمة الفردية. في البروتوكول التالي ، سنرى هذه التقنية قيد التنفيذ.

- امسك كل طرف من الشعيرات الدموية الدقيقة بسعة 10 ميكرولتر باليد اليمنى واليسرى. اسحب الشعيرات الدموية الدقيقة نحو كلا الطرفين لتطبيق الشد وإحضار مركز الشعيرات الدموية فوق الموقد لعمل شعيرات دموية مسحوبة يدويا.

تحت مجهر التشريح ، قم بقص أطراف الشعيرات الدموية المسحوبة يدويا بالملقط. اجعل حجمي فتحة الطرف مرتين تقريبا ومرة واحدة من طول المحور القصير ل C. ايليجانس الأجنة لنقل الأجنة وإزالة قشر البيض ، على التوالي.

قم بتوصيل الشعيرات الدموية المسحوبة بجهاز سحب الفم. ماصة 45 ميكرولتر من محلول ملح البيض على بئر من شريحة متعددة الآبار.

ضع 5 إلى 10 ك. ايليجانس بالغة على البئر. للحصول على C. ايليجانس المبكر الأجنة ، قم بتقطيع البالغين إلى قطع عن طريق وضع إبرتين على يمين ويسار C. ايليجانس الجسم وتحريك الإبر عبر بعضها البعض.

ماصة 45 ميكرولترا من محلول هيبوكلوريت على بئر بجوار البئر الذي يحتوي على محلول ملح البيض ، وماصة 45 ميكرولترا من وسط نمو شيلتون على الآبار الثلاثة اللاحقة. انقل الأجنة المكونة من خلية واحدة ومرحلة الخلية المبكرة إلى محلول هيبوكوريت بواسطة ماصة الفم بفتحة أكبر وانتظر لمدة 40 إلى 55 ثانية.

اغسل الأجنة عن طريق نقلها إلى الآبار الثلاثة التالية باستخدام وسط نمو شيلتون مع 1 إلى 2 ثانية في كل من البئرين الأولين. باستخدام الشعيرات الدموية المرسومة يدويا بفتحة أصغر الحجم ، كرر سحب الجنين بعناية لإزالة قشر البيض.

بعد ذلك ، قم باستمرار الماصة باستخدام الشعيرات الدموية المسحوبة يدويا لفصل الأريمة الجنينية ذات الخلية الثنائية.

- بعد إزالة قشر البيض، قلل من القوة في سحب الأجنة لأعلى ولأسفل لمنع الانفجار.