ج. ايليجانس فحص الانجذاب الكيميائي: طريقة لاختبار التحسس الكيميائي في الديدان

- لفهم الظروف التي تمت مواجهتها والاستجابة لها وفقا لذلك ، فإن الدودة C. ايليجانس لديها ، من بين أمور أخرى ، نظام حسي كيميائي متطور للغاية قادر على اكتشاف مجموعة متنوعة من المواد الكيميائية المختلفة.

تتعرض الخلايا العصبية الحسية في الرأس ، والخلايا العصبية البرمائية والشفوية الداخلية ، وكذلك الخلايا العصبية في الذيل ، والخلايا العصبية الفاسميد ، إما بشكل مباشر أو غير مباشر من خلال بشرة للظروف الخارجية. تقوم هذه الخلايا العصبية الحسية الكيميائية بترميز المعلومات ذات الصلة التي تستخدمها الدودة لإنتاج استجابة سلوكية مناسبة: سلوك يسمى الانجذاب الكيميائي.

لاختبار الاستجابة الكيميائية للروائح المتطايرة أو الإشارات الذوقية القابلة للذوبان في الماء ، قم بعزل الديدان في مرحلة النمو المرغوبة وتعريضها للاختبار الكيميائي في ساحة تجريبية معدة مسبقا. عند التعرض لمواد كيميائية مواتية مثل تلك التي ينتجها مصدر غذاء بكتيري ، C. ايليجانس يظهر الانجذاب الكيميائي الإيجابي نحو المصدر.

على العكس من ذلك ، عند تعرضها لمواد كيميائية أقل ملاءمة أو سامة مثل المعادن الثقيلة ، تظهر الدودة الانجذاب الكيميائي السلبي ، وتجنب المادة الكيميائية. ومن ثم ، فإن الطفرات الشمية أو الذوقية تفشل في تجنب المواد الكيميائية المكروهة وتبقى في ظروف غير مواتية على عكس البرية التي تتجنب الحالة المكروهة.

في مثال البروتوكول ، سنرى عرضا لمقايسة الانجذاب الكيميائي ، لاختبار نفور الدودة من النحاس.

- بعد الحضانة بين عشية وضحاها ، قم بإزالة الألواح من الحاضنة وباستخدام الجانب السفلي المحدد من اللوحة كدليل ، قم بتعبئة 100 ميكرولتر من محلول الكبريتات النحاسي 0.5 مولار المحضر حديثا على حافة الأجار لإنشاء حاجز نحاسي خارجي. ماصة 25 ميكرولتر من محلول الكبريتات النحاسية لإنشاء حاجز خط الوسط.

تأكد من أن محلول الكبريتات النحاسية لا يلامس الرقعة البكتيرية ، واترك محلول النحاس يجف على اللوحة. تحقق من الجفاف كل خمس دقائق بعد النقل بأنسجة المختبر عن طريق وضع المحلول برفق بالقرب من حافة اللوحة للتمييز.

قبل الفحص مباشرة ، انقل الكائنات الحية التجريبية إلى صفيحة أجار خالية من البكتيريا واسمح للديدان الخيطية بالتحرك بحرية لمدة دقيقة واحدة لإزالة البكتيريا الزائدة.

بعد ذلك ، قم بوضع ماصة 1 مليلتر من M9 على اللوحة مع الشباب الذين تم نقلهم قبل 24 ساعة من أجل غسل الديدان في أنبوب الطرد المركزي الدقيق. الطرد المركزي الديدان الخيطية عند 3,000 مرة جم لمدة دقيقة واحدة.

يجب أن تشكل الديدان حبيبات في قاع الأنبوب. شفط محلول M9 دون تعطيل الحبيبات الدودة. أضف 1 مليلتر من محلول M9 إلى حبيبات الدودة. اقلب الأنبوب لخلط الديدان بالمحلول.

إذا تم نقل البكتيريا الزائدة في البداية مع الديدان ، كرر ذلك لمدة خمس مرات. بعد الغسيل النهائي ، قم بشفط المادة الطافية حتى 100 ميكرولتر من محلول M9 وتبقى حبيبات الدودة. انقل الديدان على الفور من المحلول بمجرد اكتمال خطوات الغسيل.

ماصة 20 ميكرولترا من حبيبات الدودة من أسفل الأنبوب إلى النصف الخالي من البكتيريا من لوحة الفحص. تأكد من نقل 10 ديدان إلى لوحة الفحص وعدم وجود طعام ملوث. لا ينبغي نقل أي بكتيريا إلى ألواح سباق الطعام النحاسية.

قم بإزالة محلول M9 الزائد من الديدان الخيطية بأنسجة مختبرية في غضون دقيقة واحدة. تأكد من أن محلول M9 لا يتلامس مع محلول الكبريتات النحاسية ، وأن الديدان وسطح الأجار يظلان سليمين. تخلص من الديدان التي تمت إزالتها عن طريق الخطأ بأنسجة المختبر.

بمجرد إزالة محلول M9 وبدء جميع الديدان في أنماط حركية غير سائلة ، أي عندما تتوقف عن الضرب ، ابدأ ساعة توقيت الفحص. إذا تم تضمين ديدان إضافية عن طريق الخطأ ، فقم بإزالتها عن طريق قطفها بزيت الهالوكربون لضمان عدم إضافة أي بكتيريا إلى الطبق.

افحص لوحات الفحص كل 30 دقيقة. بالنسبة للوحات الفحص ذات البقع البكتيرية ، قم بتسجيل الكائنات الحية بشكل إيجابي إذا وصلت إلى رقعة الطعام على مدى أربع ساعات. بالنسبة للوحات التحكم السلبية ، قم بتسجيل الكائنات الحية بشكل إيجابي إذا عبرت الحاجز.