ج. ايليجانس تتبع الحركة: طريقة لتقييم الحركة في الديدان

- لتقييم الحركة في C. ايليجانس، استخدم الكاميرا لتسجيل حركة الديدان على لوحة أجار ، مما يضمن إضاءة متساوية للوحة أثناء التسجيل. لتقييد حركة الديدان حول اللوحة ، استخدم حلقات نحاسية. النحاس مكروه ل C. ايليجانس ، لذلك يتم محاصرة الديدان داخل الحلقات.

ضع عدة حلقات نحاسية على لوحة واحدة لتتبع الديدان في كل حلقة في وقت واحد. يسمح ذلك بإجراء تقييم التحكم والتجارب في ظل ظروف متطابقة ، مما يقلل من التباين اليومي ويسمح بإجراء مقارنات جنبا إلى جنب. سجل حركة الديدان على فترات زمنية محددة ، واستخدم برامج الكمبيوتر لتحليل ميزات سلوك القاطرة ، مثل سرعة الحركة والمسافة المقطوعة.

في مثال البروتوكول ، سنرى عرضا توضيحيا لمقايسة تتبع الحركة التي تختبر تأثيرات الكحول على سرعة حركة الدودة.

- للبدء ، خذ دقيقتين أو أقل لنقل 10 ديدان من كل مجموعة تجريبية إلى مركز حلقة نحاسية على لوحة تأقلم. هذه لوحة خالية من الإيثانول. تجنب نقل الطعام مع الديدان لأنه سيقلل من حركتها. تجنب أيضا إتلاف سطح الأجار لأن الديدان سوف تختبئ. سجل وقت التحميل على اللوحة ، وتأكد من ترتيب نقل الديدان إلى كل لوحة بأكثر من دقيقتين ، بحيث يمكن تصوير كل لوحة على حدة في الفترة الزمنية المناسبة.

دع كل لوحة تأقلم تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، انقل الديدان إلى لوحة الفحص ، باتباع الترتيب المستخدم لوضع الديدان على لوحة التأقلم. باستخدام عود دودة مسطح ذو حواف رفيعة بدون بكتيريا ، اجمع الديدان فوق المعول المسطح باستخدام حركة غرفة. بعد ذلك ، أغلق اللوحة بغشاء مختبري لتقليل فقد الإيثانول للتبخر.

- السرعة التي يتم بها نقل في هذه الخطوة مهمة للغاية ، لأن المنقولة ستتعرض للإيثانول لفترة أطول. لذلك من الجيد تدوير السلالات الموضوعة على اللوحة أولا عبر التكرارات التجريبية.

- مطلوب مجهر مزود بكاميرا فيديو عالية الدقة لتصوير الديدان الآن. حتى الإضاءة ، مثل الإضاءة الخلفية المربعة بحجم ثلاث بوصات ، أمر حيوي للتحليل. بعد ذلك ، للحفاظ على التباين ، قم بتصوير جانب وسائط اللوحة لأعلى.

قم بإعداد برنامج تحليل الصور لالتقاط أفلام 120 إطارا ، 12 بت ، تدرج رمادي ، أفلام بفاصل زمني في إطار واحد في الثانية. لتقليل حجم ملف الإخراج ، مع الاحتفاظ بدقة الصورة الكافية ، استخدم وضع تجميع اثنين في اثنين.

الآن سجل أفلاما مدتها دقيقتان من كل طبق ، بعد 10 دقائق من وضع الديدان الأخيرة على تلك الطبق. ثم قم بإجراء تسجيل ثان مدته دقيقتان ، بعد 30 دقيقة من وضع الديدان على الطبق. في هذا العرض التوضيحي ، يتم استخدام برنامج Image-Pro Plus ، حيث يمكن تكييف مجموعة متنوعة من البرامج الأخرى مع هذه التقنية. قم بتحليل الأفلام كمقاطع مدتها دقيقتان.

قم أولا بتطبيق مرشح على الصور التي تعمل على تسطيح الخلفية وتحسين تباين الكائنات الدودة. ضمن القائمة ، حدد عملية ، ثم عوامل التصفيات ، ثم تحسين ، ثم تسطيح. قم بتعيين المعلمة لخلفية داكنة وعرض ميزة 20 بكسل.

الآن ، قم بتحليل حركة في كل حلقة على حدة مع منطقة دائرية ذات أهمية تتداخل مع الحلقة النحاسية. حدد الفيروسات المتنقلة وتتبعها باستخدام الأمر Track Objects ضمن القائمة الفرعية Measure.

في نافذة جدول بيانات التعقب، استخدم الزر خيارات التعقب للسماح باستبعاد مسارات معينة والحد من أي عناصر تجريبية. ضمن علامة التبويب التتبع التلقائي ، قم بتعيين معلمات المسار على حد سرعة يبلغ 400 ميكرون لكل إطار. قم بتعيين حد التسارع إلى تلقائي.

اضبط الحد الأدنى لطول المسار الإجمالي على 400 ميكرون ، واضبط نوع الحركة السائد على فوضوي. ثم ضمن معلمة المسار، قم بتعيين الكائنات للسماح للمسارات الجزئية بطول لا يقل عن 21 إطارا والحصول على عمق إسقاط تعقب لإطار واحد.

الآن ، لبدء عملية التتبع ، انقر أولا فوق البحث عن جميع المسارات تلقائيا زر الوظيفة. يؤدي هذا إلى إظهار مربع الحوار Count / Size Options ومربع الحوار Track. حدد الخيار Manual ل Intensity Range Selection في مربع الحوار Count/Size. يوفر هذا خطوة عتبة مهمة. ثم يضبط أشرطة تمرير عتبة الكثافة لإنشاء نطاق شامل يبرز الكائنات الداكنة. تتراوح نقطة البداية الجيدة على المقياس بين 0 إلى 1,500.

الآن قم بتطبيق مرشح حجم لاستبعاد الكائنات الأكبر أو الأصغر من دودة واحدة. انتقل إلى قائمة القياس ، ثم حدد القائمة الفرعية القياس. يؤدي هذا إلى فتح مربع الحوار خيارات العدد/الحجم. هناك ، اضبط نطاق المساحة على 28,000 إلى 120,000 ميكرون مربع. واضبط نطاق المحيط على 600 إلى 2,500 ميكرون. قم بإجراء تعديلات على هذه المعلمات عند استخدام الديدان ذات الحجم غير الطبيعي.

الآن ، أكمل عملية التتبع بالنقر فوق متابعة في مربع حوار التتبع. تحقق مرة أخرى من تتبع الإخراج مع لقطات الفيلم. تأكد من تمثيل كل دودة ما لم يكن هناك سبب واضح لتصفيتها. بعد ذلك، احذف المسارات التي تنتجها الكائنات غير الدودية يدويا.

بعد ذلك ، احسب سرعة كل دودة عن طريق حساب متوسط المسافة المقطوعة بين كل إطار أو كل ثانية ، وقم بإنشاء متوسط سرعة للمسارات في كل مجموعة سكانية. ضع في اعتبارك هذا المتوسط النهائي نقطة عينة واحدة للتحليل الإحصائي للتجربة.