تغذية FITC-Dextran: طريقة لتحديد نفاذية الأمعاء في C. ايليجانس

- C. ايليجانس يستخدم كنموذج تجريبي للعدوى بمسببات الأمراض المعوية التي تسبب المرض ، جزئيا ، عن طريق تعطيل الحاجز المعوي ، وزيادة نفاذيته. لتحديد سلامة الحاجز بعد التعرض لبكتيريا أو مركب كيميائي ذي أهمية ، اجمع الديدان عن طريق غسلها من أطباقها.

بعد ذلك ، ضع هذه الديدان على أطباق أجار مع طعام مصنف يتكون من الإشريكية القولونية المقتولة بالحرارة الممزوجة ب FITC-dextaren ، وهو عديد السكاريد عالي الوزن الجزيئي مع علامة الفلورسنت.

اسمح للديدان بأكل البكتيريا المصنفة. أولئك الذين يعانون من حواجز معوية سليمة سوف يزيلون الطعام بسرعة ، بينما في الديدان ذات الأمعاء الأكثر نفاذية ، سوف تخترق علامة الفلورسنت ما وراء تجويف العضو.

انقل الديدان إلى محلول الفورمالديهايد لإصلاح. بعد 1 إلى 2 دقيقة ، استبدل الفورمالديهايد بوسائط التثبيت.

أخيرا ، قم بتصوير الديدان بواسطة المجهر الفلوري. لاحظ أن C. ايليجانس حبيبات الأمعاء ذاتية الفلورسنت ، لذلك ستكون هناك إشارة خلفية. لكن بشكل عام ، يشير التألق المعوي إلى نفاذية أعلى.

في مثال البروتوكول ، سنقوم بفحص تأثير العلاج بالجزيء الحيوي DIM على نفاذية الأمعاء للديدان المصابة ببكتيريا Pseudomonas aeruginosa المسببة للأمراض.

- تحضير الألواح المكملة ب FITC-dextran عن طريق خلط 2 مل من الإشريكية القولونية المعطلة بالحرارة مع 4 ملليغرام من FITC-dextran. أضف 100 ميكرولتر من الخليط إلى كل من 20 لوح أجار NGM طازج واترك الأطباق تجف لمدة ساعة واحدة على مقعد مختبر نظيف. بعد 48 ساعة من العلاج ، اغسل الديدان باستخدام S Buffer. انقلها إلى لوحات مكملة ب FITC-dextran وإلى ألواح NGM بدون FITC-dextran واحتضان الألواح طوال الليل.

في اليوم التالي ، اغسل الديدان باستخدام S Buffer واتركها بالزحف في لوحة أجار NGM الجديدة لمدة ساعة واحدة. أضف 50 ميكرولترا من الفورمالديهايد بنسبة 4٪ إلى كل بئر من صفيحة سوداء ذات قاع مسطح سعة 96 بئرا وانقل ما يقرب من 50 دودة إلى كل بئر. بعد 1 إلى 2 دقيقة ، قم بإزالة كل الفورمالديهايد وأضف 100 ميكرولتر من وسط التركيب في كل بئر.

- الفورمالديهايد مادة كيميائية سامة ويجب التعامل معها بحذر.