موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 2:56 دقيقة • April 30th, 2023
- C. ايليجانس يستخدم كنموذج تجريبي للعدوى بمسببات الأمراض المعوية التي تسبب المرض ، جزئيا ، عن طريق تعطيل الحاجز المعوي ، وزيادة نفاذيته. لتحديد سلامة الحاجز بعد التعرض لبكتيريا أو مركب كيميائي ذي أهمية ، اجمع الديدان عن طريق غسلها من أطباقها.
بعد ذلك ، ضع هذه الديدان على أطباق أجار مع طعام مصنف يتكون من الإشريكية القولونية المقتولة بالحرارة الممزوجة ب FITC-dextaren ، وهو عديد السكاريد عالي الوزن الجزيئي مع علامة الفلورسنت.
اسمح للديدان بأكل البكتيريا المصنفة. أولئك الذين يعانون من حواجز معوية سليمة سوف يزيلون الطعام بسرعة ، بينما في الديدان ذات الأمعاء الأكثر نفاذية ، سوف تخترق علامة الفلورسنت ما وراء تجويف العضو.
انقل الديدان إلى محلول الفورمالديهايد لإصلاح. بعد 1 إلى 2 دقيقة ، استبدل الفورمالديهايد بوسائط التثبيت.
أخيرا ، قم بتصوير الديدان بواسطة المجهر الفلوري. لاحظ أن C. ايليجانس حبيبات الأمعاء ذاتية الفلورسنت ، لذلك ستكون هناك إشارة خلفية. لكن بشكل عام ، يشير التألق المعوي إلى نفاذية أعلى.
في مثال البروتوكول ، سنقوم بفحص تأثير العلاج بالجزيء الحيوي DIM على نفاذية الأمعاء للديدان المصابة ببكتيريا Pseudomonas aeruginosa المسببة للأمراض.
- تحضير الألواح المكملة ب FITC-dextran عن طريق خلط 2 مل من الإشريكية القولونية المعطلة بالحرارة مع 4 ملليغرام من FITC-dextran. أضف 100 ميكرولتر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية