الأشعة فوق البنفسجية: طريقة لدمج المصفوفات خارج الكروموسومات

- ينتج عن إنشاء مصفوفات الحمض النووي خارج الكروموسومات عن طريق الحقن المجهري - أبسط طريقة لتوليد سلالات الديدان المعدلة وراثيا - عناصر وراثية لا تنتقل بثبات أثناء انقسام الخلايا ، وبالتالي تظهر معدلات وراثة ومستويات تعبير متغيرة. الهدف من دمج المصفوفة في الكروموسوم هو تقليل عدم الاستقرار والتباين الجيني.

للقيام بذلك ، ابدأ بمجموعة متزامنة مع العمر من الديدان المعدلة وراثيا L4 ، والتي تحمل مصفوفة خارج الكروموسومات تم إدخالها مسبقا عن طريق الحقن المجهري وتسمح لها بالنمو لتصبح بالغين حاملين. انقل هؤلاء البالغين إلى أطباق جديدة واتركهم يضعون البيض حتى يكون هناك 30 بيضة على الأقل في كل طبق. قم بإزالة البالغين واترك البيض ينمو حتى يصل إلى المرحلة L4. ثم قم بتشعيع الديدان بضوء الأشعة فوق البنفسجية. يتسبب هذا في حدوث فواصل عشوائية مزدوجة في الحمض النووي الجيني حيث قد تدمج آلية إصلاح الحمض النووي للديدان المصفوفة بشكل تعسفي.

بعد فترة نقاهة بين عشية وضحاها ، احسب عدد الديدان الباقية. تشير نسبة صغيرة من الديدان الميتة إلى تشعيع فعال. راقب الأجيال اللاحقة لعزل الخطوط المعدلة وراثيا المتكاملة متماثلة اللواقح. في مثال البروتوكول ، سنقوم بدمج مصفوفة خارج الكروموسومات ذات معدل نقل مرتفع تحمل علامة حقن مشترك فلورية معبرا عنها في البلعوم.

- تقييم معدل انتقال الخط المعدل وراثيا المراد دمجه. لكل خط مع