توليد الأشعة السينية الأولية: تقنية لتحديد فاعلية الخلية

تؤدي

خلية جذعية واحدة لسرطان الثدي إلى ظهور مجموعة من الخلايا تسمى الغلاف الشعاعي الأولي. للحصول عليها ، قم أولا بزراعة خط خلايا سرطان الثدي حتى 70٪ إلى 80٪ ملتقى ، لضمان أن الخلايا في مرحلة نموها. أضف Tripsin-EDTA لفصل الخلايا عن القارورة ، وأضف وسيطا مع مصل لإيقاف عمل Tripsin.

الآن ، خذ الخلايا في أنبوب وجهاز طرد مركزي للحصول على حبيبات الخلية. أعد تعليق الحبيبات في وسط الماموسفير بدون مصل وقم بتمرير التعليق عبر مرشح غطاء مصفاة الخلية ، للحصول على تعليق خلية واحدة. يتكون هذا المعلق من الخلايا الجذعية والخلايا السلفية والخلايا المتمايزة التي تظهر تعبيرات بروتينية مختلفة.

CD44 و CD24 هي بروتينات سطح الخلية المميزة للخلايا الجذعية لسرطان الثدي. إنها إيجابية لتعبير CD44 وسلبية ل CD24. عزل الخلايا عن معلق الخلية باستخدام التألق أو فرز الخلايا المنشطة المغناطيسية. بعد ذلك ، خذ بقعة زرقاء إلى الخلايا ، واحسب عدد الخلايا القابلة للحياة لكل مليلتر باستخدام شريحة مقياس الدم للعثور على كثافة البذر.

أخيرا ، قم بزرع الخلايا في صفيحة ملتصقة منخفضة للغاية بستة آبار ، بحيث تظل الخلايا معلقة. احتضن اللوحة لمدة 5 إلى 10 أيام دون إزعاج اللوحة حتى يبلغ قطر الكرات 40 ميكرون. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإنشاء الأشعة السينية الأولية من خط خلايا سرطان الثدي.

- عند العمل تحت غطاء مزرعة معقم ، ابدأ هذا