موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:22 دقيقة • April 30th, 2023
- للبدء ، قم بزرع خلايا سرطان الدم البشرية في وسط مزرعة طازجة واحتضانها للفترة المطلوبة. بعد الحضانة ، قم بتلطيخ كمية صغيرة من تعليق الخلية هذا باستخدام تريبان بلو وقم بتقييم صلاحية الخلية باستخدام شريحة عداد الخلايا TC20. الخلايا الميتة قابلة للاختراق وتأخذ الصبغة سالبة الشحنة ، في حين أن الخلايا القابلة للحياة غير منفذة.
بعد ذلك ، أضف ميثيل بيتا سيكلودكسترين إلى قارورة الثقافة لاستنفاد نسبة الكوليسترول في الخلية بشكل كاف ، مما يجعلها عرضة للموجات فوق الصوتية. احتضان الخلايا للفترة المطلوبة. املأ نظام صوتنة الخلية بالماء منزوع الأيونات وقم بإزالته لبضع دقائق لتجنب فقاعات الفراغ. انقل الكمية المطلوبة من الخلايا في قارورة التلألؤ وقم بإرفاق القارورة بجهاز تثبيت نظام صوتنة الخلية.
ضع جهاز التثبيت أعلى البوق واضبط الارتفاع المطلوب من أعلى البوق. اضبط النبضات المطلوبة للمدة المطلوبة لصوتنة الخلايا. أضف التريبان الأزرق إلى تعليق الخلية وضعه في عداد الخلايا TC20 لتحليل قابلية الخلية للحياة والتلف. تظهر خلايا ابيضاض الدم المعالجة بميثيل بيتا سيكلودكسترين ، عند تعرضها للموجات فوق الصوتية منخفضة التردد ، تحلل كبير للخلايا.
في البروتوكول التالي ، سوف ندرس صوتنة الخلايا وتقييم الضرر لخلايا سرطان الدم البشرية.
- لتحضير الخلايا للصوتنة ، قم أولا بزرعها 4 مرات 10 إلى الخلايا الرابعة لكل مليلتر ف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية