مقايسة وضع العلامات على نبض برومودوكسيوريدين: تقنية لقياس تكاثر الخلايا

- ابدأ بتعليق خلايا ابيضاض الدم الذي يحتوي على كثافة الخلايا المطلوبة. أجهزة الطرد المركزي وإعادة تعليق الخلايا في وسط مزرعة يحتوي على المصل. تعزز إضافة المصل النمو المستمر للخلايا وتتحرك الخلايا عبر مراحل دورة الخلية المختلفة. قم بتخفيف الخلايا في محلول الملصقات برومودوكسي يوريدين ، أو BrdU ، وزراعتها في ظل ظروف فسيولوجية للمدة المطلوبة.

تأخذ

الخلايا في التخليق أو المرحلة S BrdU - نظير الثايميدين - الذي يحل محل الثايميدين أثناء عملية تكرار الحمض النووي. الطرد المركزي للخلايا لإزالة BrdU الزائد وإعادة تعليق الخلايا في وسط مناسب. انقل الخلايا إلى لوحة آبار متعددة. اسمح للخلايا بالنمو في ظل ظروف فسيولوجية لفترات زمنية مختلفة.

في فترات زمنية مختلفة ، تتقدم الخلايا خلال ما تبقى من مراحل S و G2 والانقسام الفتيلي و G1 وتدخل في دورة الخلية التالية ، مما يسمح بتقدير تكاثر الخلايا. قم بإجراء تلطيخ الأجسام المضادة لتمييز BrdU بالجسم المضاد الفلوري وقياس تكاثر الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي.

داخل مقياس التدفق الخلوي ، تمتص الفلوروكرومات طاقة الليزر والفلوريس. يرتبط عدد الخلايا المتكاثرة ارتباطا مباشرا بالتألق الذي لوحظ. في مثال البروتوكول ، سنوضح وضع العلامات النبضية لخلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد.

- يستخدم هذا البروتوكول خط خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد ، NALM6 ، ولكن يمكن تطبيق