مقايسة وضع العلامات على نبض برومودوكسيوريدين: تقنية لقياس تكاثر الخلايا

0 views • 3:59 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- ابدأ بتعليق خلايا ابيضاض الدم الذي يحتوي على كثافة الخلايا المطلوبة. أجهزة الطرد المركزي وإعادة تعليق الخلايا في وسط مزرعة يحتوي على المصل. تعزز إضافة المصل النمو المستمر للخلايا وتتحرك الخلايا عبر مراحل دورة الخلية المختلفة. قم بتخفيف الخلايا في محلول الملصقات برومودوكسي يوريدين ، أو BrdU ، وزراعتها في ظل ظروف فسيولوجية للمدة المطلوبة.

تأخذ

الخلايا في التخليق أو المرحلة S BrdU - نظير الثايميدين - الذي يحل محل الثايميدين أثناء عملية تكرار الحمض النووي. الطرد المركزي للخلايا لإزالة BrdU الزائد وإعادة تعليق الخلايا في وسط مناسب. انقل الخلايا إلى لوحة آبار متعددة. اسمح للخلايا بالنمو في ظل ظروف فسيولوجية لفترات زمنية مختلفة.

في فترات زمنية مختلفة ، تتقدم الخلايا خلال ما تبقى من مراحل S و G2 والانقسام الفتيلي و G1 وتدخل في دورة الخلية التالية ، مما يسمح بتقدير تكاثر الخلايا. قم بإجراء تلطيخ الأجسام المضادة لتمييز BrdU بالجسم المضاد الفلوري وقياس تكاثر الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي.

داخل مقياس التدفق الخلوي ، تمتص الفلوروكرومات طاقة الليزر والفلوريس. يرتبط عدد الخلايا المتكاثرة ارتباطا مباشرا بالتألق الذي لوحظ. في مثال البروتوكول ، سنوضح وضع العلامات النبضية لخلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد.

- يستخدم هذا البروتوكول خط خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد ، NALM6 ، ولكن يمكن تطبيقه على أي خط خلوي غير ملتصق. حافظ على خلايا NALM6 في قوارير مزرعة T-75 في RPMI كامل عند 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون في الهواء. بعد جمع الخلايا وإجراء تعداد الخلايا ، أعد تعليق الخلايا في RPMI كامل عند 2 في 10 إلى 6 خلايا لكل مليلتر.

قم بتخفيف الخلايا 1 في 2 باستخدام BrdU Complete RPMI لإنتاج تركيز خلية نهائي 1 في 10 إلى 6 خلايا لكل مليلتر. تعامل مع BrdU بحذر لأنه مطفر محتمل ومطيسان. احتضان عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 45 دقيقة.

بعد ذلك ، قم بتخفيف الخلايا 1 في 10 باستخدام RPMI الكامل. جهاز طرد مركزي عند 150 مرة G لمدة خمس دقائق وتخلص بعناية من كل المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في حجم صغير من RPMI الكامل ، وقم بإجراء عدد الخلايا ، واضبط تركيز الخلية إلى 1 في 10 إلى 6 خلايا لكل مليلتر. ماصة 1 مليلتر من الخلايا في كل بئر من صفيحة 48 بئرا.

ماصة 1 مليلتر من DPBS في أي آبار غير مأهولة للحصول على نتائج أكثر قابلية للتكرار. احتضان عند 37 درجة مئوية في 5٪ من ثاني أكسيد الكربون في الهواء للنقاط الزمنية المطلوبة ، اعتمادا على ما يهدف التصميم التجريبي إلى قياسه. عند اكتمال الحضانة ، انقل جميع الخلايا إلى أنابيب FACS.

اشطف كل بئر بالتتابع بأحجام 1 مليلتر من PBS إلى الحجم الإجمالي النهائي 5 ملليلتر. جهاز طرد مركزي عند 150 مرة G لمدة خمس دقائق وإزالة كل المادة الطافية بعناية. الخلايا جاهزة الآن للتلوين ، والتي يجب إجراؤها على الفور. إذا كانت هناك حاجة إلى تلطيخ السطح ، فيجب إجراؤه الآن ، قبل التثبيت.

12:46

Bromodeoxyuridine (BrdU) التوسيم والفرز وبعد الإسفار خلية المنشط للتحديد ، ثقافة مستقلة عن العضوية الذائبة الكربون المهينة العوالق البكتيرية

Related Videos

0 Views

12:19

تحليل المركز دورة الخلية في خلايا الثدييات

Related Videos

0 Views

09:59

التحقيق في توليف الحمض النووي الريبي استخدام الوسم 5-بروموريديني وإيمونوبريسيبيتيشن

Related Videos

0 Views

10:55

مناعي الكشف عن النظائر ثيميدين الثاني (CldU وإيدو) في الأنسجة الابتدائية

Related Videos

0 Views

11:23

قياس حركية تقدم دورة الخلية مع وصفها الأيض والتدفق الخلوي

Related Videos

0 Views

03:24

تلطيخ التألق المناعي BrdU: تقنية لتحديد الخلايا في مراحل مختلفة من دورة الخلية

Related Videos

0 Views

02:54

مقايسة تخليق الحمض النووي: تقنية لتقييم تخليق الحمض النووي في الخلايا المتكاثرة باستخدام دمج الثايميدين المثيل المشع

Related Videos

0 Views

08:52

تتبع الزمني للتقدم دورة الخلية باستخدام التدفق الخلوي دون الحاجة إلى مزامنة

Related Videos

0 Views

08:13

الكمي السريع لمأرمي يسببها Mitogen في اللمفاويات التائية لتحديد الأدوية المناعية

Related Videos

0 Views

07:17

قياس انتشار خلايا العضلات الملساء الوعائية باستخدام الكيمياء فوق

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026