تلطيخ التألق المناعي BrdU: تقنية لتحديد الخلايا في مراحل مختلفة من دورة الخلية

0 مشاهدات3:24 د • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- برومودوكسيوريدين أو BrdU هو نظير نيوكليوزيد ثايميدين اصطناعي. خلال مرحلة التوليف من دورة الخلية ، يستبدل BrdU الثايميدين ويتكامل في الحمض النووي المركب حديثا. يسمح BrdU المدمج بتتبع تقدم دورة الخلية. للكشف عن BrdU المدمج ، أولا ، قم أولا بإصلاح الخلايا ونفاذها لجعلها قابلة للاختراق.

بعد ذلك ، عالج الخلايا بإنزيم الحمض النووي لشق خيوط الحمض النووي وفضح BrdU المدمج. بعد ذلك ، أضف جسما مضادا مضادا للفلورسنت مناسب يحمل علامة BrdU. يدخل الجسم المضاد إلى النواة ويرتبط بسهولة ب BrdU المكشوف الموجود في الحمض النووي.

بالإضافة إلى ذلك ، عالج الخلايا بصبغة مناسبة ملزمة للحمض النووي الفلورسنت. ترتبط الصبغة بالحمض النووي ، مما يسمح بتحديد محتوى الحمض النووي الكلي. استخدم قياس التدفق الخلوي للكشف عن التألق من كل من BrdU والحمض النووي المسماة.

تعمل

شدة التألق من الحمض النووي المسمى على تمييز الخلايا في مراحل دورة الخلية المختلفة بناء على التباين في محتوى الحمض النووي الكلي. تحدد إشارة الفلورسنت من BrdU موضع دورة الخلية الحالي للخلايا المدمجة في BrdU.

في هذا المثال ، سنقوم بإجراء تلطيخ الفلورسنت المناعي BrdU لخلايا ابيضاض الدم الليمفاوية الحادة NALM-6.

- قبل تلطيخ الأجسام المضادة ، عالج الخلايا بالحمض النووي. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول الحمض النووي واحتضانها لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية. أضف ملليلترا واحدا من محلول الغسيل ، وقم بالطرد المركزي للخلايا ، وتخلص من المادة الطافية. يمكن إجراء تلطيخ الأجسام المضادة للعلامات داخل الخلايا بخلاف BrdU في وقت واحد مع تلطيخ BrdU.

- من المهم إعداد ضوابط التعويض التي تتكون من خلايا وخلايا غير ملوثة بعلامة كل فلوروكروم واحد. من الناحية المثالية ، استخدم نفس الأجسام المضادة لضوابط التعويض مثل تلك المستخدمة في الأنابيب التجريبية.

- أعلق الخلايا في 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت للغسيل مع ميكرولتر واحد لكل 10 إلى 6 خلايا من الجسم المضاد BrdU. في حالة استخدام الأجسام المضادة لمستضدات أخرى محددة داخل الخلايا ، يجب إضافتها في هذه المرحلة. احتضان الخلايا لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

بعد 20 دقيقة ، اغسل الخلايا بملليلتر واحد من محلول الغسيل كما هو موضح سابقا. أخيرا ، قم بتلطيخ الحمض النووي لتحليل دورة الخلية. قم بفك الحبيبات عن طريق النقر على الأنبوب وإضافة 20 ميكرولتر من محلول 7-AAD. من الأهمية بمكان استخدام كمية ثابتة من 7-AAD لكل خلية. أعد تعليق الخلايا في مليلتر واحد من المخزن المؤقت للتلطيخ. بعد ذلك ، قم بإجراء تحليل قياس التدفق الخلوي.

11:23

قياس حركية تقدم دورة الخلية مع وصفها الأيض والتدفق الخلوي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:39

الكمية المناعي الفحص لقياس التفاوت في مستويات البروتين في Centrosomes

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:34

عزل وتلطيخ الخلايا الكيراتينية الجلد الماوس لدورة الخلية تحليل محدد للتعبير البروتين الخلوي عن طريق قياس الخلايا الشامل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:19

تحليل المركز دورة الخلية في خلايا الثدييات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:59

مقايسة وضع العلامات على نبض برومودوكسيوريدين: تقنية لقياس تكاثر الخلايا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:37

طريقة قائمة على التألق المناعي لقياس إجهاد النسخ المتماثل في الخلايا السرطانية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:52

تتبع الزمني للتقدم دورة الخلية باستخدام التدفق الخلوي دون الحاجة إلى مزامنة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:37

استخدام بيريميدين التناظري ، 5-iodo-2′-deoxyuridine (IdU) مع علامات دورة الخلية لإنشاء مراحل دورة الخلية في منصة قياس الخلايا الجماعية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:37

تقنيات الكيمياء الهيستولوجية المناعية لتحليل الانتشار الخلوي وتكوين الخلايا العصبية في الفئران باستخدام Thymidine Analog BrdU

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:44

تقييم استئصال نهاية الحمض النووي المزدوج العالمي باستخدام وسم الحمض النووي BrdU إلى جانب تصوير تمييز دورة الخلية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026