JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:27 د • April 30th, 2023
- في نظام الزراعة المشتركة ثنائي الأبعاد ، تزرع أنواع متعددة من الخلايا معا في ألواح استزراع مسطحة. يسهل نظام الثقافة هذا دراسة تفاعلات الخلايا وسلوكها في المختبر. لإنشاء زراعة مشتركة لخلايا سرطان الدم مع الخلايا اللحمية لنخاع العظام ، أو BMSCs ، أضف تعليق خلايا اللوكيميا إلى ثقافة أحادية الطبقة الملتصقة من BMSCs. احتضان اللوحة في ظل ظروف الاستزراع المناسبة. الحفاظ على الثقافة المشتركة عن طريق استبدال 90٪ من وسط الاستزراع كل أربعة أيام.
خلال هذه الثقافة المشتركة ثنائية الأبعاد ، تتفاعل خلايا سرطان الدم مع BMSCs وتوطين مناطق متميزة في الثقافة ، وتشكل ثلاث مجموعات فرعية. يسمح الفحص المجهري لتباين الطور بالتمييز بين المجموعات الفرعية الثلاثة بصريا. يتم تصنيف المجموعة الأولى من خلايا سرطان الدم التي تظهر تطفو بحرية في الوسط على أنها خلايا معلقة. تبدو المجموعة الثانية من خلايا سرطان الدم التي التصقت بسطح الطبقة الأحادية BMSC ساطعة وتصنف على أنها خلايا ساطعة الطور.
تبدوالمجموعة الثالثة من خلايا سرطان الدم التي هاجرت تحت الطبقة الأحادية خافتة وتصنف على أنها خلايا خافتة الطور. في البروتوكول التالي ، نقوم بإجراء الزراعة المشتركة لسرطان الدم الليمفاوي الحاد ، أو خلايا ALL ، مع الخلايا اللحمية لنخاع العظم البشري.
- ابدأ بزرع 5 إلى 20 مرة 10 إلى خلايا ابيضاض الدم السادسة في 10 ملليلتر من وسط الثقافة الخاصة بالورم على صفيحة 100 ملم من 80٪ إلى 90٪ من الخلايا اللحمية لنخاع العظم أو بانيات العظم. كل أربعة أيام ، قم بإمالة اللوحة إلى الجانب وشفط كل الوسط باستثناء 1 مليلتر ، مع الحرص على عدم إزعاج طبقة الخلية الملتصقة. بعد ذلك ، أضف بعناية 9 ملليلتر من وسط زراعة خلايا اللوكيميا الطازجة في زاوية اللوحة على طول الجانب لضمان الحد الأدنى من اضطراب الخلايا الملتصقة.
بعد اليوم الثاني عشر من الزراعة المشتركة ، قم بعمل ماصة وسط المزرعة برفق لأعلى ولأسفل فوق اللوحة حوالي 5 إلى 10 مرات لجمع خلايا سرطان الدم العائمة ، ونقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا. بعد ذلك ، أعد زرع الخلايا في صفيحة جديدة من 80٪ إلى 90٪ من الخلايا اللحمية لنخاع العظم أو بانيات العظم ، كما هو موضح للتو. بحلول اليوم 4 ، ستكون ثلاث مجموعات فرعية من خلايا سرطان الدم قد تشكلت ، مع خلايا اللوكيميا العالقة التي تطفو بحرية في الوسط ، وتلتصق خلايا ابيضاض الدم الساطعة بسطح الطبقة الأحادية للخلية الملتصقة ، وهاجرت خلايا ابيضاض الدم الخافتة تحت الطبقة الأحادية.