حصاد الاكتساب الفرعي للكريات الدموية: طريقة للفصل المكاني للمجموعات السكانية الفرعية لخلايا اللوكيميا عن الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد

- عندما يتم زراعة خلايا سرطان الدم بشكل مشترك مع الخلايا اللحمية الوسيطة ، فإنها تتفاعل مع الخلايا اللحمية وتشكل ثلاث مجموعات فرعية. الخلايا العالقة العائمة بحرية ، والخلايا الساطعة الطورية الملتصقة بسطح الطبقة الأحادية اللحمية المتوسطة ، والخلايا الخافتة الطورية أسفل الطبقة الأحادية اللحمة الوسيطة. لفصل كل مجموعة سكانية فرعية ، خذ لوحة زراعة الأنسجة مع طبقة أحادية للخلايا اللحمية الوسيطة.

خلايا ابيضاض الدم في وسط الثقافة الخاصة بالورم على الطبقة الأحادية ، وتحتضن الصفيحة للمدة المطلوبة. بعد ذلك ، اجمع الخلايا السرطانية في حالة تعليق عن طريق سحب الخلايا العائمة بحرية في أنبوب منفصل. الآن ، أضف الوسائط الجديدة إلى اللوحة والماصة بقوة لإخراج الخلايا السرطانية الساطعة من سطح الطبقة الأحادية الوسيطة.

اجمع هذه الخلايا عن طريق سحب العينة في أنبوب منفصل. أضف التربسين إلى الطبق لإزالة الخلايا الوسيطة الملتصقة. أضف مصل الجنين البقري ، أو FBS ، لإيقاف عمل التربسين وتفكيك مجاميع الخلايا. الآن ، اجمع الخلايا الخافتة في أنبوب. قم بالطرد المركزي جميع الأنابيب الثلاثة التي تحتوي على مجموعات فرعية مختلفة من الخلايا بشكل فردي وأعد تعليق الحبيبات في وسائط جديدة لمزيد من التحليل. في البروتوكول التالي ، سنقوم بعزل خلايا سرطان الدم المعلقة ، والطور الساطع ، وخافت الطور من الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد.

- لحصاد الورم المعلق ، قم بشفط الوسط من لوحة الزراعة المشتركة لخلية سرطان الدم واستخدم نفس الوسيط لشطف اللوحة برفق مرة واحدة. بعد ذلك ، قم بنقل مجموعة خلايا الابيضاض المعلق العائمة إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا. لحصاد مجموعة الورم الفرعية ذات الطور المشرق ، أضف 10 مل من الوسط الطازج مرة أخرى إلى لوحة الزراعة المشتركة

وشطف ما يقرب من خمس مرات بقوة كافية ، لإزالة خلايا سرطان الدم الملتصقة دون إزاحة طبقة أحادية الخلية الملتصقة. بعد ذلك ، قم بنقل المجموعة الفرعية الساطعة إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا. لحصاد المجموعة الفرعية للورم الخافت ، قم بإزالة الوسط المتبقي بشطف PBS بمقدار مليلتر واحد وافصل الخلايا بثلاثة ملليلتر من التربسين عند 37 درجة مئوية.

بعد خمس دقائق، اضغط برفق على جوانب اللوحة لإخراج الخلايا الملتصقة، متبوعا بإضافة مليلتر واحد من FBS لإيقاف التفاعل الأنزيمي. بعد ذلك ، اشطف المصل ثلاث إلى خمس مرات لتفكيك أي مجاميع خلوية كبيرة ونقل المجموعات السكانية الفرعية غير المنقاة إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 15 ملليلترا. عندما يتم جمع جميع المجموعات السكانية الفرعية ، قم بتدوير الخلايا وإعادة تعليق كل من الكريات في مليلتر واحد من الوسط الدافئ مسبقا.