فرز خلايا سرطان الدم القائم على العمود G-10: طريقة لتنقية خلايا ابيضاض الدم الليمفاوية الحادة من الخلايا اللحمية لنخاع العظام

- للبدء ، أضف التربسين إلى صفيحة تحتوي على خلايا ابيضاض الدم المزروعة بشكل مشترك مع الخلايا اللحمية لنخاع العظم لتفكك الخلايا. جهاز طرد مركزي وإعادة تعليق الحبيبات باستخدام وسائط دافئة مسبقا للحفاظ على بقاء الخلية. يحتوي عمود G-10 على حبات ديكستران متشابكة تنتفخ في الماء لتشكيل مصفوفة هلامية.

قم

بموازنة عمود G-10 بوسائط تم تسخينها مسبقا لملء الفراغ بين الخرزات ، مما يضمن التراوغ البطيء للوسائط من العمود. حافظ على درجة حرارة مناسبة في العمود لمنع تكون فقاعات الهواء. قم بتحميل خليط الخلية ببطء على حبات الجل في عمود G-10. احتضان الخلايا الموجودة على عمود G-10 في درجة حرارة الغرفة للمدة المطلوبة. بناء على خصائص سطح الخلية وحجمها ، تقيد حبات الجل بشكل تفضيلي الخلايا اللحمية لنخاع العظم الأكبر حجما ، مما يسمح بفصل خلايا سرطان الدم.

أضف وسائط دافئة مسبقا إلى العمود واجمع معلق خلايا سرطان الدم. الطرد المركزي لتعليق الخلية وإعادة تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت مناسب. استخدم السكان النقيين لخلايا ابيضاض الدم لمزيد من التحليل. في المثال التالي ، سنقوم بفصل مجموعة نقية من خلايا ابيضاض الدم عن الزراعة المشتركة اللحمية باستخدام عمود G-10.

- مع إغلاق محبس تماما لكل مجموعة فرعية ، استخدم ماصة سعة 1000 ميكرولتر لإضافة حجم الخلايا بالكامل البالغ 1 مليلتر ، بحكمة ، على الجزء العلوي من أحد أعمدة G-10 المعدة ، مع التأكد من بقاء الخلايا أعلى أو داخل حبيبات G-10. اسمح للخلايا بالتحتضن على حبيبات G-10 لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم أضف 1 إلى 3 ملليلتر من الوسط الطازج الدافئ مسبقا إلى العمود وافتح المحبس حتى يخرج الوسيط ببطء من الأعمدة بحكمة.

استمر في إضافة وسيط مسخن مسبقا إلى الأعمدة بزيادات من 1 إلى 2 ملليلتر. عندما يتم جمع ما مجموعه 15 إلى 20 مل من خلايا سرطان الدم ، أغلق محبس وقم بتغطية أنبوب التجميع. ثم, قم بتدوير الخلايا وإعادة تعليق الحبيبات في المخزن المؤقت المناسب لتحليل المصب.