أخذ عينات الدم المدارية الرجعية: طريقة لعزل الخلايا أحادية النواة من الجيوب الأنفية المدارية الرجعية للفأر

- أولا ، أمسك الفأر المخدر من رقبته وقم بإبراز العين. أدخل أنبوبا شعريا دقيقا في القناة الإنسية للعين. اسمح للدم بالتدفق عن طريق العمل الشعري في أنبوب. انقل الدم إلى أنبوب مغطى ب EDTA واحتفظ به على الجليد. يربط EDTA أيونات الكالسيوم ، مما يمنع تخثر الدم. تقلل درجة الحرارة المنخفضة من نشاط تحلل السكر للخلايا وفرص التلوث الميكروبي.

بعد ذلك ، قم بتخفيف الدم بمخزن مؤقت يحتوي على EDTA واخلطه جيدا. أضف بعناية طبقة من محلول الفصل المناسب إلى القاع ، دون إزعاج الدم. الطرد المركزي التعليق. يجمع البوليمر الموجود في محلول الفصل خلايا الدم الحمراء والرواسب في الأسفل. الخلايا والصفائح الدموية أحادية النواة ، كونها أخف من البوليمر ، ترسب فوق التدرج البوليمري.

قم بإزالة الطبقة العليا التي تحتوي على البلازما واجمع الحلقة البيضاء غير الشفافة التي تحتوي على خلايا أحادية النواة. قم بتخفيف الخلايا باستخدام PBS وأجهزة الطرد المركزي لإزالة البلازما والصفائح الدموية المتبقية. استخدم الخلايا أحادية النواة المعزولة لمزيد من التحليل. سيوضح البروتوكول التالي عزل الخلايا أحادية النواة عن فأر متولد الولادة يتم حقنه بخط خلية سرطان الدم C1498.

- أدخل أنبوبا شعريا في القناة الإنسية لعين المصاب بسرطان الدم المخدر. سيتم سحب 100 إلى 200 ميكرولتر من الدم من الجيب الحجاجي إلى الأنبوب الشعري. قم بإزالة الأنبوب والتحكم