موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:12 دقيقة • April 30th, 2023
- May-Grunwald Giemsa ، أو تلطيخ MGG ، هو إجراء من خطوتين للتلوين التفريقي لخلايا نخاع العظام ، أو BMCs. لبدء التلوين ، احصل على مسحة مركزة أحادية الطبقة من BMCs على شريحة زجاجية. اترك اللطاخة تجف في الهواء. عالج الخلايا أولا بصبغة May-Grunwald التي تحتوي على اليوزين والأزرق الميثيلين المذاب في الميثانول.
يعمل الميثانول المذيب في البداية على إصلاح الخلايا. الميثيلين الأزرق ، صبغة أساسية ذات شحنة موجبة صافية ، تلطخ المكونات الخلوية الحمضية مثل الأحماض النووية. يوزين ، صبغة حمضية ذات شحنة سالبة صافية ، تلطخ المكونات الخلوية الأساسية مثل البروتينات الكاتيونية السيتوبلازمية. عالج الخلايا بمحلول عازل من درجة الحموضة 6.8 لتمكين الصبغة من الترسيب والارتباط جيدا بالمواد الخلوية.
بالإضافة إلى ذلك ، عالج الخلايا بصبغة Giemsa ، التي تحتوي أيضا على أصباغ حمضية وأساسية ، لتعزيز تأثير التلوين العام. تعمل الأصباغ الأساسية ، الأزرق السماوي والميثيلين الأزرق ، على تكثيف بقع المكونات الحمضية بينما تزيد الصبغة الحمضية ، اليوزين ، من بقعة المكونات الأساسية.
تحت المجهر ، تظهر كريات الدم الحمراء بنية وردية والصفائح الدموية كنقاط أرجوانية صغيرة. تعرض الخلايا المحببة نواة متعددة الفصوص أرجوانية زرقاء وسيتوبلازم حبيبي أحمر. تظهر الخلايا المحببة باللون الأزرق الصافي مع نواة كبيرة أرجوانية وردية. في البروتوكول التالي ، نعرض تلطيخ MGG لخلايا نخاع العظام.
- لتحضير خلايا نخاع العظم للتلوين ، ضع الشرائح أولا في غرف يمكن التخلص منها باستخدام بطاقات الترشيح المرفقة مسبقا وضع الغرف في جهاز طرد خلوي. أضف 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS إلى كل غرفة بطاقة مرشح وقم بالطرد المركزي للشرائح لفترة وجيزة. في نهاية الدوران ، أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل غرفة وقم بالطرد المركزي للخلايا.
ثم قم بإزالة الشرائح بعناية من الغرف لتجفيف الهواء. لتلطيخ خلايا نخاع العظم ، اغمر الشرائح في جرة كوبلين تحتوي على محلول May-Grunwald لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، انقل الشرائح إلى وعاء من محلول عازل بدرجة حموضة 6.8 لمدة دقيقة واحدة. ثم انقل الشرائح إلى محلول Giemsa R لمدة 10 دقائق ، متبوعا بغسل لمدة 10 ثوان بالماء المحايد للأس الهيدروجيني.
بعد الغسيل ، اترك الشرائح تجف في الهواء وقم بتطبيق قطرة واحدة من وسط التركيب على كل عينة. بعد ذلك ، ضع إحدى حواف زجاج الغطاء على الشريحة وقم بخفض زجاج الغطاء بحذر على الخلايا ، واضغط برفق لإزالة أي فقاعات هواء.