الطرد المركزي المتدرج الكثافة: طريقة لعزل خلايا CLL من الدم المحيطي

- في مرضى ابيضاض الدم الليمفاوي المزمن ، أو مرضى CLL ، تزداد الخلايا الليمفاوية للخلايا البائية بشكل كبير في نخاع العظام والدم. لعزل خلايا CLL هذه من عينة الدم ، أولا ، عالج العينة بمزيج تخصيب الخلايا البائية البشرية الذي يفصل الخلايا البائية باستخدام الانتقاء السلبي. تتعرف الأجسام المضادة الموجودة في الكوكتيل على وجه التحديد على المستضدات التي تعبر عنها الخلايا غير البائية وكريات الدم الحمراء وتربط بينها ، وتشكل مجمعات كثيفة.

بعد ذلك ، ضع العينة فوق وسط متدرج الكثافة بكثافة مثالية لعزل الخلايا الليمفاوية. مع الطرد المركزي اللاحق ، تنفصل مكونات الدم المختلفة بناء على الاختلافات في كثافتها بالنسبة إلى وسط التدرج. تستقر مجمعات الخلايا الحمراء غير البائية ذات الكثافة العالية من خلال الوسط ، وتشكل حبيبات. يشكل جزء البلازما الأقل كثافة الطبقة العليا. تشكل خلايا CLL الأقل كثافة طبقة بيضاء عند الواجهة المتوسطة ذات كثافة البلازما.

انقل الطبقة البيضاء بعناية إلى أنبوب جديد. جهاز طرد مركزي مرة أخرى للحصول على حبيبات تحتوي على خلايا CLL منقاة. في البروتوكول التالي ، نعرض عزل خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي المزمن ، من عينات دم المريض.

- الحصول على عينات دم محيطية من مرضى ابيضاض الدم الليمفاوي المزمن المتفق عليهم مسبقا في أنابيب جمع الدم EDTA مصحوبة بعدد الخلايا البيضاء.

- يجب اعتبار عينات الدم ال