موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:39 دقيقة • April 30th, 2023
- يساعد مقايسة التدفق خارج الخلية في دراسة عملية التمثيل الغذائي للخلية عن طريق قياس مسارين رئيسيين للطاقة - تحلل السكر وتنفس الميتوكوندريا. أثناء تحلل السكر ، تقوم الخلايا باستقلاب الجلوكوز وإفراز اللاكتات في الفضاء خارج الخلية جنبا إلى جنب مع البروتونات ، والتي يتم تحديدها عن طريق قياس معدل التحمض خارج الخلية أو ECAR. أثناء تنفس الميتوكوندريا ، تستخدم الخلايا الأكسجين لإنتاج ATP ، والذي يقاس بتحديد معدل استهلاك الأكسجين أو OCR.
تظهر الخلايا السرطانية امتصاصا مرتفعا للجلوكوز لأنها تغير معدل الأيض للتكيف والحفاظ على التكاثر الخلوي غير المنظم. لتحليل التمثيل الغذائي في الخلايا السرطانية ، قم أولا بتجميع صفيحة دقيقة لتحليل التدفق تحتوي على طبقة أحادية للخلايا السرطانية الملتصقة وخرطوشة مستشعر رطبة. انقل مجموعة اللوحة إلى محلل التدفق. داخل المحلل ، تنزل مجسات المستشعر لإنشاء غرفة صغيرة عابرة. لقياس التدفق خارج الخلية ، يقوم منفذ الحقن بإدخال مركبات الاختبار في الصفيحة الدقيقة في نقاط زمنية محددة مسبقا.
بناء على التمثيل الغذائي للخلايا ، تتقلب تركيزات الأكسجين المتاح والبروتونات المنبعثة في الغرفة الدقيقة. يستشعر اثنان من الفلوروفورات المضمنة في قاعدة الخرطوشة ويقيسانها في وقت واحد مستويات الأكسجين والبروتون ، مما يدل على تنفس الميتوكوندريا وتحلل السكر ، على التوالي. في البروتوكول التا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية