تخصيب الخلايا التائية: تقنية لعزل الخلايا التائية من الخلايا المختلطة عن طريق الفصل المغناطيسي

- تلعب الخلايا التائية ، وهي فئة من الخلايا الليمفاوية ، دورا نشطا في مكافحة العدوى. إلى جانب العديد من أنواع خلايا الدم الأخرى ، توجد الخلايا التائية ذات الكفاءة المناعية في طحال الفأر والغدد الليمفاوية. لعزل الخلايا التائية بشكل انتقائي ، قم بحصاد طحال الفئران والغدد الليمفاوية ونقعها على مصفاة الخلايا. اغسل الأنسجة بوسائط مناسبة للحصول على تعليق خلية واحدة.

أضف البوتاسيوم كلوريد الأمونيوم ، أو المخزن المؤقت ACK ، لتحلل خلايا الدم الحمراء. جهاز طرد مركزي لفصل خلايا الدم السليمة عن المحللة. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في مخزن مؤقت مناسب. عالج المعلق بمزيج من الأجسام المضادة للفأر البيوتينيل لاستهداف خلايا الدم مثل الخلايا المحببة والخلايا البائية والخلايا القاتلة الطبيعية وأي كريات الدم الحمراء المتبقية. لا يتم استهداف الخلايا التائية وبالتالي تظل غير موسومة.

بعد ذلك ، أضف الميكروبيدات المغناطيسية المضادة للبيوتين إلى التعليق. ترتبط جميع الخلايا المسماة بالبيوتين بالميكروبيدات. عندما تبقى تحت تأثير مجال مغناطيسي قوي ، تلتصق الخلايا المصنفة مغناطيسيا بجدار الأنبوب. تظل الخلايا التائية غير المسماة معلقة. اجمع الخلايا التائية المخصبة غير المنضجة في أنبوب تجميع جديد. في البروتوكول التالي ، نعرض عزل الخلايا التائية عن طحال الفأر والغدد الليمفاوية ، باستخدام تقنية الفصل المغناطيسي.

- اجمع الغدد الليمفاوية والطحال في مصفاة مسام 40 ميكرومتر واستخدم مكبس حقنة لنقع الأنسجة من خلال المرشحات لتحرير الخلايا. اغسل المصفاة والمكبس بوسط RPMI المكمل بنسبة 1٪ FBS لجمع جميع الخلايا وترسيب الخلايا عن طريق الطرد المركزي. أضف 5 ملليلتر من المخزن المؤقت لتحلل ACK إلى حبيبات الخلية.

بعد خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ، أوقف التفاعل ب 5 ملليلتر من الوسط المكمل بنسبة 1٪ FBS وحبيبات خلايا الدم البيضاء عن طريق الطرد المركزي. أعد تعليق الحبيبات في 5 ملليلتر من المخزن المؤقت MACS للعد وتخفيف الخلايا إلى تركيز 2 في 10 إلى 8 خلايا لكل ميكرولتر في مخزن MACS الجديد. أضف التركيز المناسب من الأجسام المضادة للكريات الحمراء ، والخلايا المحببة ، والمضادة للخلايا البائية ، والأجسام المضادة لنضوب الخلايا القاتلة الطبيعية لكل 1 في 1 في 10 إلى الخلايا الستة لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.

في نهاية الحضانة ، اغسل الخلايا ب 10 ملليمترات من المخزن المؤقت MACS المثلج ، وأعد تعليق الحبيبات عند 1 في 10 إلى 8 خلايا لكل مليلتر في مخزن MACS الجديد. بعد ذلك ، أضف 0.22 ميكرولتر من الميكروبيدات المضادة للبيوتين لكل 1 في 10 إلى 6 خلايا مع الخلط لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.

في نهاية الحضانة ، اغسل الخلايا ب 10 ملليلتر من عازلة MACS المثلجة وجمع الخلايا التائية المخصبة غير المنضمة عن طريق فصل الخرزة المغناطيسية باستخدام فاصل MACS السريع وفقا لبروتوكولات عزل الخرزة القياسية. في نهاية الفصل ، قم بترسيب الخلايا التائية عن طريق الطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات في 5 ملليلتر من المخزن المؤقت MACS الطازج للعد.