موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:57 دقيقة • April 30th, 2023
- عوامل النسخ هي بروتينات ترتبط بموقع معين على الحمض النووي لتنظيم التعبير الجيني. تغير الأخطاء في عوامل النسخ هذا النشاط ، مما يؤدي إلى الإفراط في التعبير عن الجينات ، مما يسبب السرطان. لفهم دور عوامل النسخ وتنظيم الجينات ، يمكننا إجراء مقايسة الترسيب المناعي للكروماتين أو CHIP ، ويعد قص الكروماتين خطوة مهمة في سير عمل CHIP.
لقص الكروماتين ، قم بتثبيت مركب بروتين الحمض النووي عن طريق إضافة الفورمالديهايد. يربط الفورمالديهايد البروتينات بتسلسل الحمض النووي المرتبط عن طريق تكوين روابط تساهمية. بعد ذلك ، استخدم عازلة تحلل مناسبة لتحلل الخلايا لإطلاق الكروماتين الذي يحتوي على مجمعات بروتين الحمض النووي المتشابكة وأجهزة الطرد المركزي. قص الكروماتين باستخدام إنزيم نوكلياز المكورات الدقيقة. يشق هذا الإنزيم الكروماتين بين النيوكليوسومات ويهضم نهايات الحمض النووي السائبة. الطرد المركزي الخليط وجمع المادة الطافية.
قم بتحميل المادة الطافية على هلام الاغاروز TBE لتحليل الحجم المناسب لشظايا الحمض النووي. ضع مجالا كهربائيا عبر الجل ، مما يؤدي إلى تحرك الحمض النووي للكروماتين سالب الشحنة نحو الأنود. تتحرك الأجزاء الأصغر إلى أسفل الجل. يظهر الكروماتين المنفصم على شكل مسحة في الجل. في البروتوكول التالي ، سنقوم بقص الكروماتين لخط خلايا سرطان الدم النخاعي المزمن باستخدام الصوتنة.
- للبدء ، املأ أنبو
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية