موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 6:29 دقيقة • April 30th, 2023
- ترسيب مناعي للكروماتين ، أو ChIP ، هو تقنية تستخدم لتحديد تفاعلات البروتين والحمض النووي في الخلايا. ترتبط البروتينات بمواقع محددة على الحمض النووي وتنظم التعبير الجيني. أولا ، قم بتثبيت مركب بروتين الحمض النووي بالفورمالديهايد. يربط الفورمالديهايد البروتينات بتسلسل الحمض النووي المرتبط عن طريق تكوين روابط تساهمية.
بعد ذلك ، استخدم عازلة تحلل مناسبة لتحلل الخلايا لإطلاق الكروماتين الذي يحتوي على مجمعات بروتين الحمض النووي المتشابكة. الطرد المركزي التعليق وصوتنة المادة الطافية للحصول على شظايا الكروماتين. بعد ذلك ، قم بتسمية العينة بجسم مضاد مناسب يرتبط على وجه التحديد بالبروتين المرتبط بالحمض النووي.
أضف حبات مغناطيسية متخصصة إلى العينة. تتعرف الخرزة على الجسم المضاد وترتبط به. استخدم مغناطيسا لجمع الخرزات المغناطيسية بمركب الجسم المضاد والبروتين والحمض النووي. اغسل العينة لإزالة الكروماتين أو الأجسام المضادة غير المرتبطة. أضف حاجزا عالي التركيز من الملح إلى المركب واحتضنه في درجات حرارة أعلى لعكس الروابط المتقاطعة لبروتين الحمض النووي.
باستخدام مغناطيس ، اجمع المادة الطافية التي تحتوي على الحمض النووي والبروتينات. أضف إنزيم البروتيناز K لتحلل البروتينات في العينة. أضف حاجزا مناسبا لترسيب الحمض النووي واستخدمه لمزيد من التحليل. سيوضح البروتوكول التالي ترسيب الكروماتين المناعي في
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية