موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:21 دقيقة • April 30th, 2023
- يمكن للخلايا الجذعية والسلفية المكونة للدم أو HSPC أن تتجدد ذاتيا وتتمايز إلى أنواع مختلفة من خلايا الدم. تتراكم HSPCs تدريجيا طفرات الحمض النووي خلال العمر ، مما قد يساهم في الإصابة بسرطان الدم. لتحليل مثل هذه الطفرات ، يتم إنشاء HSPCs عادة من نخاع العظام.
ابدأ بإضافة الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور إلى الخلايا أحادية النواة - الخلايا الجذعية البالغة المعزولة من نخاع العظام - واحتضانها للمدة المطلوبة. ترتبط الأجسام المضادة بعلامات سطح خلية معينة مثل CD34. الآن ، قم بتحميل الخليط في القياس الخلوي المنشط بالفلورة أو آلة FACS.
تتألق الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور عند اصطدامها بالليزر. تمر قطرات الخلايا الفردية عبر الكاشف الذي يقيس شدة التألق ، والتي على أساسها تمتلك القطرة شحنة كهربائية. في وجود المجالات الكهرومغناطيسية ، تنتقل الخلايا الموجبة الشحنة إلى الحاوية السالبة والعكس صحيح.
الآن ، قم بزراعة HSPCs الإيجابية CD34 التي تم فرزها بواسطة FACS في وسط مناسب للمدة المطلوبة حتى تصبح المستنسخة مرئية. بعد ذلك ، قم بإزاحة المستنسخة عن طريق سحب العينات القوية والطرد المركزي لحبيبات الخلايا. قم بتخزين الحبيبات التي تحتوي على HSPCs نسيلة عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لمزيد من التحليل. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإنشاء استنساخ HSPC من الخلايا أحادية النواة.
- ابدأ هذا الإجراء
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية