فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا: طريقة لعزل الخلايا الإيجابية c-kit

- c-Kit ، أو CD117 ، هو مستقبل عبر الغشاء للتيروزين كيناز يتم التعبير عنه بواسطة الخلايا الجذعية المكونة للدم أو الخلايا السلفية الموجودة في نخاع العظام والدم. كما أنها علامة للكشف عن سرطان الدم النخاعي الحاد.

لعزل الخلايا الإيجابية c-Kit ، قم بحصاد عظام أرجل الفئران وسحقها لتحرير النخاع من الداخل. قم بتصفية معلق النخاع لإزالة أي شظايا عظمية. ضع طبقة من المرشح الذي يحتوي على خلايا نخاع العظم على وسط تدرج الكثافة ، وجهاز الطرد المركزي لفصل الخلايا أحادية النواة عن الكسور الأخرى.

اجمع الطبقة العكرة من الخلايا أحادية النواة في أنبوب يحتوي على حبات دقيقة مترافقة مع أجسام الفئران المضادة ل CD117. احتضان لمجمعات حبة الأجسام المضادة للارتباط بمستقبلات CD117 على الخلايا الإيجابية c-Kit. مرر التعليق المحتضن من خلال عمود مغناطيسي يوضع في مجال مغناطيسي. تظل جميع الخلايا الإيجابية c-Kit المسماة بالميكروبيدات المغناطيسية في العمود ، بينما تمر الخلايا غير المسماة.

قم بإزالة العمود من المجال المغناطيسي ، واغسل المحتويات باستخدام مخزن مؤقت مناسب لتصفية الخلايا الموجبة c-Kit. في البروتوكول التالي ، سنعرض عزل الخلايا الإيجابية c-Kit عن نخاع عظم الفأر المعدل وراثيا.

- للبدء ، احصد عظام الساق من فأر قتل رحيم. نظف الأنسجة من العظام بمشرط. ثم ضع العظام في PBS بارد على الجليد وسحق العظام بمدمقة. بعد ذلك