لماذا يعد استبعاد صبغة تريبان الزرقاء (trypan blue) أمراً هاماً لتقدير كمية خلايا T-ALL؟

يتيح استبعاد صبغة Trypan blue التمييز بين الخلايا الورمية الحية والميتة بناءً على سلامة الغشاء، مما يوفر قياساً كمياً للخلايا القابلة للحياة لاستخدامها في مدخلات المقايسة. ويدعم هذا القياس العد الموثوق للخلايا عبر مقياس كرات الدم (hemocytometer)، وهو أمر ضروري لتوحيد الظروف التجريبية اللاحقة. يضمن التقييم الدقيق للحيوية استخدام خلايا T-ALL الوظيفية فقط في دراسات الفحص أو التحقق من الصحة.

كيف يدعم عزل خلايا T-ALL الموُسمة ببروتين GFP التحقق من صحة الهدف في أبحاث سرطان الدم؟

يتيح عزل خلايا T-ALL الموسومة بـ GFP التصوير المباشر وتنقية الخلايا الورمية من أسماك الزيبرا، مما يقلل من التلوث الناتج عن المجموعات غير الورمية. وتسمح هذه المجموعة الخلوية المنقاة بالاستقصاء المحدد للمسارات والأهداف المرتبطة بسرطان الدم دون تداخل من اللمفاويات السليمة. وبذلك، تزيد هذه الطريقة من الموثوقية في تحديد الأهداف من خلال توفير نظام غني بالمرض لتقليل المخاطر الميكانيكية.

ما الدور الذي يلعبه غسل تجويف الجسم بمحلول الهيبارين في عزل خلايا T-ALL؟

يؤدي غسل تجويف الجسم بمحلول الهيبارين إلى إزالة خلايا الدم الحمراء الزائدة التي قد تلوث عينة الخلايا الورمية وتتداخل مع التحليلات اللاحقة. تعمل هذه الخطوة على تحسين نقاء العينة عن طريق تقليل الإشارات الخلفية والحطام الخلوي أثناء عملية جمع الخلايا القائمة على الفلورة. كما تساهم العينات الأكثر نقاءً في تعزيز موثوقية صبغ التريبان الأزرق وتقدير كمية الخلايا الحية.

لماذا يُوصى بتصفية معلق الخلايا عبر مصفاة بمسامية 40 μm قبل العد؟

تؤدي عملية الترشيح عبر مصفاة بقطر 40 μm إلى تفكيك تكتلات الخلايا وإزالة الحطام، مما يضمن الحصول على معلق من الخلايا المفردة لإجراء عد دقيق باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer). تمنع هذه الخطوة المبالغة في تقدير كثافة الخلايا الناتجة عن التجمعات، وتعزز من إمكانية تكرار النتائج عبر العينات المكررة. ويعد المعلق المتجانس أمراً بالغ الأهمية للحصول على قياسات كمية دقيقة للمتغير التابع في المقايسات القائمة على الخلايا.

كيف يؤثر تكرار عملية عزل خلايا T-ALL على التعاون المشترك بين الوظائف المختلفة في مجال اكتشاف الأدوية؟

يتيح العزل القابل للتكرار لخلايا T-ALL الحية توفير مدخلات متسقة للمقايسات عبر فرق البيولوجيا والفحص والتحليلات، مما يقلل من التباين في النتائج التجريبية. وتضمن البروتوكولات الموحدة أن تكون البيانات الناتجة قابلة للمقارنة عبر الدراسات والمواقع المختلفة، مما يدعم اتخاذ قرارات موثوقة في تحديد أولويات الأهداف. ويعزز هذا الاتساق الاستمرارية الانتقالية من خلال توفير مصدر يعتمد عليه من الخلايا ذات الصلة بالمرض للتقييم قبل السريري.

عزل خلايا T-ALL ذات العلامات الفلورية: طريقة لعزل خلايا T-ALL من أسماك الزرد البالغة

JoVE Encyclopedia of Experiments

أبحاث السرطان

0 مشاهدات • 4:43 د • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد للخلايا التائية ، أو T-ALL ، هو نوع من السرطان يحدث عندما تفشل الخلايا الليمفاوية في النضج وتبقى كخلايا غير ناضجة تسمى الخلايا الليمفاوية. هذه الخلايا غير الطبيعية غير فعالة في مكافحة العدوى. نظرا لأن هذه الخلايا غير الناضجة تنقسم بسرعة ، فإنها تفوق عدد خلايا الدم السليمة ويمكن أن تنتقل إلى أعضاء مثل الطحال والكبد والجهاز العصبي المركزي.

الأورام في الزرد تشبه تلك التي تشكلت في البشر. لذلك ، فإن سمك الزرد هو النموذج المفضل لتوليد الخلايا السرطانية T-ALL.

ابدأ باختيار الأسماك المحولة التي تظهر إشارات الفلورسنت ، مما يشير إلى انتشار الخلايا السرطانية. قم بإزالة رأس السمكة الرحيم واغسل تجويف الجسم بمحلول الهيبارين لإزالة خلايا الدم الحمراء الزائدة. الآن ، قم بحقن عازلة مناسبة في تجويف الجسم. استخدم ضغطا برفق من الخارج واجمع المخزن المؤقت الذي يحتوي على الخلايا السرطانية في أنبوب ميكروفوج.

تلطخ الخلايا باللون الأزرق وراقبها تحت المجهر. تظهر الخلايا السرطانية الحية الفلورية وعديمة اللون عند تلطيخها باللون الأزرق التايبان ، حيث يستبعد غشاء الخلية سالب الشحنة اللون الأزرق السلبي من الدخول داخل الخلية. يدخل التريبان الأزرق الخلايا الميتة من خلال الغشاء المسامي ، مما يؤدي إلى تلطيخها باللون الأزرق. في البروتوكول التالي ، سنقوم بعزل الخلايا السرطانية T-ALL المسماة GFP من أسماك الزرد البالغة.

- تحضير 20 مل من FBS 10٪ معطل بالحرارة في 0.9X PBS. أضف 1 مليلتر من محلول FBS / PBS إلى قارورة من ملح الصوديوم الهيبارين الذي يحتوي على 300 وحدة من مضاد التخثر. بعد ذلك ، باستخدام مجهر epifluorescent ، اختر الأسماك التي غزت فيها الخلايا السرطانية 50٪ من الجسم أو الأسماك التي تم تحديدها على أنها تواجه صعوبة في الأكل أو السباحة.

القتل الرحيم للأسماك عن طريق نقلها إلى محلول من 1 إلى 2 ملليغرام لكل مليلتر من التريكائين في ماء السمك. راقب بحثا عن حركة الخياشيم ونبضات القلب لتأكيد القتل الرحيم.

بعد إزالة رأس السمكة ، قم بحقن 100 ميكرولتر من محلول الهيبارين بماصة في تجويف الجسم لإزالة خلايا الدم الحمراء الزائدة. استنشق كل السائل الذي يسكب وقم بتقطيعه إلى أنبوب طرد مركزي دقيق مقاس 1.5 ملم. بعد ذلك ، باستخدام أطراف ماصة جديدة ، اغسل تجويف الجسم مرتين أخريين أو حتى لا يحتوي محلول الغسيل على أي دم وتخلص من السائل الذي تم جمعه من جميع الغسلات.

لجمع خلايا ابيضاض الدم ، قم بحقن 100 ميكرولتر من محلول FBS-PBS في تجويف الجسم المغسول مسبقا. تحت مجهر تشريح ، قم بالضغط برفق على جسم السمكة باستخدام طرف ماصة لإجبار الخلايا السرطانية على الخروج. اجمع السائل المنبعث في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر. كرر العزل حتى يتم حصاد معظم الخلايا السرطانية.

اجمع جميع الخلايا في نفس أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 1.5 مل واحتفظ بالتعليق الذي تم الحصول عليه في درجة حرارة الغرفة. ثم امزج الخلايا السرطانية المعزولة عن طريق سحب العينة برفق لفصل كتل الخلايا. قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مرشح شبكي 40 ميكرومتر واغسل الفلتر مرة إلى مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من FBS-PBS.

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026

عزل خلايا T-ALL ذات العلامات الفلورية: طريقة لعزل خلايا T-ALL من أسماك الزرد البالغة

نظرة عامة

مكونات الدراسة الرئيسية

مجال العلوم

خلفية علمية

الغرض من الدراسة

الطرق المستخدمة

النتائج الرئيسية

الاستنتاجات

الأسئلة الشائعة

الأهمية الصناعية التنفيذية

التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية

الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف

الفحص وتطوير المقايسة

الأبحاث الانتقالية وما قبل السريرية

تكامل مسار العمل والتدفق الإجرائي

التأثير التشغيلي والمؤسسي

اعتبارات التنفيذ

الأسئلة الشائعة حول الصناعات الدوائية الحيوية

قياس التردد من ورم الخلايا باستخدام الحد من نشر زرع الخلايا في التخفيف اسماك الزرد مسانج

تقييم ما قبل السريرية من التيروزين كيناز مثبطات لعلاج اللوكيميا الحادة

عزل ماليجنانت وعدم ماليجنانت ب الخلايا من lck:eGFP الزرد

الوسم نسب خلايا اسماك الزرد مع فلوريسئين الليزر ديكستران Uncagable

فحص السكان الجانبيين: طريقة لعزل السكان الجانبيين للخلايا السرطانية من أسماك الزرد

عزل خلايا الدماغ من يرقات الزرد: تقنية للحصول على الخلايا العصبية السليمة والضامة والخلايا الدبقية الصغيرة من أنسجة دماغ أسماك الزرد

عزل وتوصيف الخلايا واحدة من اسماك الزرد الأجنة

عزل السكان الجانب في الخلايا التائية التي يسببها ميك الخلايا اللمفاوية الحادة اللمفاوية في الزرد

العزلة واستخراج الحمض النووي الريبي للخلايا العصبية والضامة وميكروجليا من العقول الزرد اليرقات