فحص السكان الجانبيين: طريقة لعزل السكان الجانبيين للخلايا السرطانية من أسماك الزرد

- يستهدف العلاج الكيميائي للأورام عموما الخلايا عالية التكاثر ، تاركا وراءه مجموعة فرعية صغيرة من مجموعات الخلايا الجذعية ، مما يؤدي إلى تلخيص الورم. تسمى هذه الخلايا الجذعية بالسكان الجانبيين. نظرا لأن السكان الجانبيين يفتقرون إلى علامات خلوية محددة ، فإننا نستخدم مقايسة تدفق الصبغة لعزلها عن الخلايا السرطانية الأخرى.

للبدء ، أضف صبغة Hoechst إلى الخلايا السرطانية المعزولة لسمك الزرد. يدخل Hoechst إلى النواة ويرتبط بالمنطقة الغنية ب A-T في الأخدود الصغير للحمض النووي. تحتوي المجموعة الجانبية للخلايا على تركيز أعلى من ناقلات ABC على السطح ، مما يؤدي إلى تدفق سريع للصبغة خارج الخلية ، مما يؤدي إلى تألق منخفض.

خذ قارورة أخرى من الخلايا السرطانية المعالجة بالخيوط وأضف إليها فيراباميل. تعمل هذه القارورة كعنصر تحكم ، لأن الفيراباميل يمنع ناقلات ABC مما يتسبب في تقليل تدفق التدفق ، وبالتالي زيادة التألق في السكان الجانبيين.

احتضان كل من خلايا التحكم والعينة في الظلام. بعد ذلك ، قم بمواجهة الخلايا الملطخة باستخدام يوديد البروبيديوم الذي يدخل نواة الخلايا الميتة حصريا ويقمع بين قواعد الحمض النووي ، مما يؤدي إلى تلطيخ الخلايا الميتة باللون الأحمر. أخيرا ، قم بفرز الخلايا باستخدام فارز الخلايا المنشط بالفلورة. في البروتوكول التالي ، سنقوم بعزل السكان الجانبيين للخلايا السرطانية من سمك الزرد.