Name: المفرد جزيء التصوير النقل النووية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-09T17:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 13 s
Description: تعلم تصوير الجزيئات الفردية لدراسة النقل النووي عبر المجمعات النووية باستخدام مجهر الفلورة. يتيح هذا الأسلوب تحليل ديناميكيات النقل بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد أيد هذا المشروع من المنحة لتعزيز القدرات البحثية (جامعة بولينغ غرين ستيت).

<ol><li>Ma, J., Yang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Molecule+Snapshots+of+Three-Dimensional+Distribution+of+Transient+Interactions+in+Nuclear+Pore+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Single Molecule Snapshots of Three-Dimensional Distribution of Transient Interactions in Nuclear Pore Complex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Sarma, A., Goryaynov, A., Yang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Molecule+Imaging+of+the+Calcium-Regulated+Nuclear+Pore+Permeability%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Single Molecule Imaging of the Calcium-Regulated Nuclear Pore Permeability.</a> , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Yang, W., Musser, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+single+molecules+transiting+through+nuclear+pore+complexes+using+narrow-field+epifluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Visualizing single molecules transiting through nuclear pore complexes using narrow-field epifluorescence microscopy.</a> Methods. 39, 316-328 (2006).</li>
<li>Yang, W., Gelles, J., Musser, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+single-molecule+translocation+through+nuclear+pore+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Imaging of single-molecule translocation through nuclear pore complexes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 12887-12892 (2004).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

يجب توخي الحذر لضمان اقامة colocalization السليم للجزيئات واحد NE أثناء التجربة. من المهم أيضا أن تقدم إشارة ارتفاع نسبة الضوضاء ، وخصوصا عندما إشارة منخفضة نظرا لوضع العلامات أو photobleaching الفقراء. يقتصر دقة الترجمة عن الضوضاء الخلفية (التي تنشأ من خارج التركيز مضان ، CCD الضوضاء قراءات العوامل الظلام ، والحالية وغيرها).

المفرد جزيء التصوير النقل النووية

Single-Molecule Imaging of Nuclear Transport

وقد ثبت جدوى النهج جزيء المجهري مضان واحد لتكون ذات جدوى كبيرة في فهم التفاعلات البيولوجية على مدى العقد الماضي. وظل التحقيق في التفاعلات الجزيئية مع ارتفاع قرارات الزمانية والمكانية عميقة داخل الخلايا صعبة بسبب إشارات ضعيفة بطبيعتها الناشئة من الجزيئات الفردية. يعمل يانغ مؤخرا وآخرون. أثبتت أن ضيق المجال المجهري epifluorescence التصور يسمح للنقل النواة للهيولى على مستوى الجزيء واحد. من النهج جزيء واحد ، حركية مهمة ، مثل النقل النووي الوقت والكفاءة ، لجزيئات البضائع التي تعتمد على إشارة ومستقلة قد تم الحصول عليها. وصف نحن هنا بروتوكولا للنهج المنهجي مع القرار ، أي spatiotemporal تحسين نانومتر و 12 مللي 0.4. مكن قرار تحسين لنا لالتقاط النقل النشط والأحداث العابرة نشر السلبي من خلال مسام المجمعات النووية (مجلس الشعب) في شبه سليمة الخلايا. نتوقع أن يستخدم هذا الأسلوب في توضيح الأحداث الأخرى ملزمة والاتجار داخل الخلايا.

approch قدم واحدة جزيء المجهري رؤى الرواية إلى النقل النووي.

ثبتت فائدة مناهج مجهر الفلورسنت للجزيء المنفرد في تقديم مساعدة كبيرة في فهم التفاعلات البيولوجية على مدى...

يحتوي الغلاف النووي للخلية على ما يقرب من 2000 معقد من المسام النووية التي تسمح بنقل الجزيئات القابلة للذوبان في الماء مثل RNA، والريبوسومات، وبروتينات معينة، والكربوهيدرات، والجزيئات الإشارية. ومن خلال إضافة جزيئات شحنة مُعلمة إلى الخلايا النفاذة، يمكن تصور حركة الجزيئات الفردية عبر المسام النووية باستخدام المجهر الفلوري. وتُعد الصور المتقطعة بفاصل زمني (Time-lapse) ضرورية لتحديد التموضع بالإضافة إلى الخصائص المكانية والزمانية مثل وقت النقل، وكفاءة الاستيراد والتصدير، وتكرار الدخول. مرحباً، أنا أليكس أوف، طالب دكتوراه من مختبر مجهر الجزيء الواحد في قسم الأحياء بجامعة بولينج جرين الحكومية.أنا آشا بي شيما، طالبة ماجستير من مختبر مجهر الجزيء الواحد. وأنا جمعة، زميلة ما بعد الدكتوراه هنا في مختبر مجهر الجزيء الواحد.سنعرض لكم اليوم إجراءً للتصوير الجزيئي الفردي للنقل النووي عبر معقدات المسام النووية في خلايا HeLa. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة انتقال الجزيئات المختلفة عبر معقد المسام النووي. لذا، لنبدأ.لتحضير البروتينات الخاصة بتجربة النقل النووي، يتم تحويل بكتيريا E coli من سلالة JM 1 0 9 التي تعبر عن الجينات المسؤولة عن إنتاج بروتينات الشحنة النووية تقليدياً، وتُزرع في وسط LB ثم تُحفز باستخدام IPTG. وبمجرد وصول الخلايا إلى طور النمو اللوغاريتمي بكثافة ضوئية تتراوح بين 0.7 و 0.

single-molecule-imaging-of-nuclear-transport

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن هنا وصف الأدوات والأساليب للكشف عن جزيئات البروتين وحيد fluorescently المسمى-التفاعل مع جزيء DNA واحدة معلقة بين اثنين المجهرية المحاصرين بصريا.

الجمع بين التلاعب جزيء واحدة والتصوير لدراسة التفاعلات-DNA البروتين

يصف لنا إجراء للكشف عن هذا الموقع في العناصر الكيميائية في الخلايا البشرية، فضلا عن تقديرها في المختبر . الطريقة مناسبة تماما لأي نوع من الخلايا ومفيد بشكل خاص للتحاليل الكيميائية الكمية في الخلايا المفردة التالية في المختبر أكسيد المعدن جسيمات نانوية التعرض.

في الموقع الكشف والتحديد الكمي خلية مفردة لجسيمات نانوية أكسيد المعدن باستخدام تحليل ميكروبروبي النووية

يصف هذا البروتوكول طريقة لقياس بحساسية معدل النقل نوكلوسيتوبلاسميك داخل الخلايا العصبية الحركية مثل نسك-34 الخلايا عن طريق قياس التغير في الوقت الحقيقي في استيراد النووي للبروتين نلس-نيس-غفب.

فحص لقياس نوكلوسيتوبلاسميك النقل في الوقت الحقيقي داخل موتور الخلايا العصبية مثل نسك-34 الخلايا

ويصف هذا البروتوكول أسلوب جديد يسمح للتصور الكمي من تشكيل معقدة من البروتينات الفخ، استناداً إلى نقل الطاقة الرنين فورستر، وعمر fluorescence التصوير المجهري.

تصور داخل الخلايا المطوقة الاتجار بواسطة عمر Fluorescence التصوير المجهري

هنا توضح لنا كيف جزيء واحد التعريب تنشيط صور مجهرية يمكن الاضطلاع على المحطة الطرفية الأعصاب الحركية ليعيش melanogaster المورفولوجية الثالثة instar اليرقة.

في فيفو تتبع في محطة Presynaptic الأعصاب الحركية المورفولوجية جزيء واحد

نحن نصف أساليب التفكيك الضوئي الفلورية لتحليل النقل المحوري للاعصاب في محاور عصبية واحدة من الأعصاب النخاعية من الفئران المحورة وراثيا التي تعبر عن بروتين الليفية العصبية تنشيطية ضوئية.

التصوير والتحليل لنقل الليفية العصبية في العصب الذبي الماوس المخزّن

تصف الطرق الحالية نهجا غير متناسب لتصوير الكالسيوم عالي الدقة وشبه المجزأ في الجسم الحي في Caenorhabditis elegans باستخدام مؤشرات الكالسيوم المشفرة وراثيا المتاحة بسهولة.

التصوير تحت الخلوي للتعامل مع الكالسيوم العصبي في الجسم الحي

يصف هذا البروتوكول كيفية إعداد وإجراء التحليلات الآلية بكفاءة لبيانات تصوير الخلايا الحية التي تم الحصول عليها من تتبع النقل النووي للخلايا عبر أدوات البصريات الوراثية.

استخدام أدوات علم الوراثة البصرية LEXY و LINuS وتحليل الصور الآلي لتحديد ديناميكيات النقل النووي للسيتوبلازمات في الخلايا الحية

يقدم هذا البروتوكول سير عمل فعال لتصوير المجهر لتحديد موقع جزيء واحد لنوى الأرابيدوبسيس المعزولة، باستخدام العزل والتثبيت ووضع العلامات المحسنة لتحقيق تصور موثوق على نطاق نانوي للكروماتين وبوليميراز RNA II. يمكن تكييف هذا النهج بسهولة مع بروتينات أخرى مرتبطة بالكروماتين أو تعديلات الهيستونات للتصوير عالي الدقة.

بروتوكول مبسط لمجهر تحديد موقع جزيء واحد في نوى الأرابيدوبسيس

وينظم الغشاء ظيفة البروتين الدهني من تكوين غشاء الخلية. تفاصيل هذا الفيديو المقالة كيفية تشكيل التصحيح باستخدام طبقة ثنائية الأقطاب التصحيح ، فضلا عن كيفية استخدام القنوات غراميسيدين وصحفيين من خصائص الغشاء تغييرها.

طرق جزيء واحد لرصد التغيرات في خصائص طبقة ثنائية مطاطا

تعلم تصوير الجزيئات الفردية لدراسة النقل النووي عبر المجمعات النووية باستخدام مجهر الفلورة. يتيح هذا الأسلوب تحليل ديناميكيات النقل بدقة عالية.

المفرد جزيء التصوير النقل النووية

استكشف المزيد من الفيديوهات