JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:30 د • March 4th, 2025
ابدأ بشريحة دماغ إكليلية ثابتة مسبقا ومنزوعة البرافين ومعاد ترطيبها تحتوي على خلايا عصبية تخضع لموت الخلايا المبرمج ، والتي تتميز بموت الخلايا وتجزئة الحمض النووي.
للكشف عن موت الخلايا المبرمج باستخدام مقايسة TUNEL ، عالج شريحة الدماغ باستخدام إنزيم بروتيناز K.
يدخل Proteinase-K إلى الخلايا العصبية ويعطل DNases ، مما يمنع تدهور الحمض النووي.
اشطف الشريحة لإزالة أي إنزيمات متبقية.
أضف عازلة تحتوي على ثلاثي فوسفات ديوكسي يوريدين المسمى بصبغة الفلورسنت ، أو dUTPs ، وترانسفيراز ديوكسي نوكليوتيديل الطرفي ، أو إنزيم TdT ، ثم احتضانه.
في الخلايا العصبية موت الخلايا المبرمج ذات شظايا الحمض النووي الوفيرة ، يربط إنزيم TdT dUTPs الفلورية هذه بمجموعات 3′-hydroxyl الحرة لشظايا الحمض النووي.
في المقابل ، يظل الحمض النووي للخلايا العصبية السليمة غير مسمى.
تلطخ الأنسجة ب DAPI ، وهي صبغة نووية ترتبط بالحمض النووي في كل من الخلايا العصبية السليمة والخلايا المبرمجة ، مما يؤدي إلى تلطيخ نواتها باللون الأزرق.
عند التصور ، تؤكد الخلايا العصبية التي تحتوي على كل من التألق الأزرق والأخضر موت الخلايا المبرمج في أنسجة المخ.