JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:28 د • March 4th, 2025
جمع أقسام الدماغ الثابتة من الفئران المصابة بفيروس داء داخل المخ على فترات محددة بعد الوفاة.
يصيب الفيروس الخلايا العصبية الهرمية في القشرة الدماغية ، والبروتينات الفيروسية المعبر عنها تتموضع داخل الهياكل الحبيبية داخل الهيولى والمعروفة باسم أجسام التضمين.
عالج الأقسام بكلوريد الأمونيوم لتحييد المجموعات التفاعلية التي يسببها التثبيت وتقليل تلطيخ الخلفية.
اغمر الأقسام في بيروكسيد الهيدروجين لتعطيل البيروكسيديز الداخلي وتقليل الإشارات غير المحددة.
ضع محلول مانع يحتوي على منظف لاختراق الأغشية الخلوية وإخفاء مواقع الربط غير المحددة.
احتضان بالأجسام المضادة الأولية الخاصة بالبروتينات الفيروسية.
اغسل واحتضن بالأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالبيوتين التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
اغسل مرة أخرى وأدخل أفيدين مترافق بإنزيم البيروكسيداز ، والذي يرتبط بالبيوتين ، متبوعا بركيزة كروموجينيك يحولها الإنزيم إلى منتج ملون.
تصور الأجسام المشمولة المناعية التي تحتوي على بروتينات فيروسية باستخدام المجهر.
مع زيادة وقت ما بعد الوفاة ، يصبح تدهور الخلايا العصبية واختفاء الأجسام الشاملة واضحا.