موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:30 دقيقة • March 4th, 2025
خذ فأرا يتعرض لتدفق الدم المقيد إلى نصف الكرة الأيمن من الدماغ ، مما يؤدي إلى تلف BBB.
حقن الألبومين الموسوم بالفلوروفور عن طريق الوريد ، والذي يعبر BBB التالف ، ويصل إلى الدماغ.
الحصول على أقسام الدماغ الثابتة كيميائيا.
أضف المخزن المؤقت المانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
تطبيق الأجسام المضادة المترافقة مع البيروكسيديز التي تستهدف الألبومين الموسم بالفلوروفور.
أضف ركيزة كروموجينيك، يحولها البيروكسيديز إلى راسب كثيف الإلكترون.
أدخل رابع أكسيد الأوزميوم لإصلاح الدهون الغشائية وتعزيز التباين.
جفف الأقسام مع زيادة تركيزات الكحول.
أضف أسيتات اليورانيل ، التي ترتبط بالأحماض النووية والبروتينات لزيادة التباين.
جفف مرة أخرى مع زيادة تركيزات الكحول ، مع الانتهاء من أكسيد البروبيلين لتضمين الراتنج. قم بتضمين الأقسام في الراتنج.
تحديد المناطق الملطخة بالكروموجين واستئصالها مجهريا.
أعد تضمين هذه الأقسام في الراتنج وقم بإعداد شرائح رفيعة للغاية.
قم بتركيب الشرائح على شبكات المجهر الإلكتروني (EM).
صبغة مع سترات الرصاص لتعزيز تباين المصفوفة خارج الخلية.
تابع مع EM لفحص سلامة BBB.