موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:25 دقيقة • March 4th, 2025
ابدأ بأنسجة دماغ الفأر في مخزن استخلاص يحتوي على مثبطات البروتياز ومنظف.
تجانس الأنسجة لإطلاق البروتينات في المخزن المؤقت. تمنع مثبطات الإنزيم البروتيني نشاط البروتياز ، مما يمنع تدهور البروتين.
الطرد المركزي وجمع المادة الطافية بالبروتينات.
أضف عازلة تحميل تحتوي على منظف وعامل اختزال لتشويه طبيعة البروتين.
قم بتحميل البروتينات من عنصر التحكم وأخذ عينة على جل SDS-PAGE. تطبيق مجال كهربائي لفصل البروتينات إلى نطاقات متميزة.
بعد الرحلان الكهربائي ، انقل عصابات البروتين إلى غشاء.
عالج الغشاء بمحلول احتوائي يحتوي على حليب خال من الدسم لمنع مواقع التفاعل غير المحددة.
احتضان بالأجسام المضادة الأولية التي ترتبط على وجه التحديد ببروتينات تاو الفسفرية.
يغسل ويحتضن بالأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالإنزيم.
أضف ركيزة تتفاعل مع الإنزيم لإنتاج إشارة ضوئية ، مما يؤكد بروتينات تاو الفسفرية.
يشيرالشريط المضيء المكثف في العينة مقارنة بعنصر التحكم إلى علم الأمراض التنكسية العصبي.