JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:22 د • March 4th, 2025
خذ الأنسجة المتجانسة من دماغ الثدييات الذي يحتوي على كل من بروتينات البريون الطبيعية ومجاميع البريون غير المطوية المسؤولة عن الأمراض التنكسية العصبية.
احتضان بإنزيم محلل للبروتين لهضم البريونات الطبيعية ، مع ترك الركام المقاوم سليما.
عالج الركام بمخزن مؤقت متغير الطبيعة عند درجة حرارة عالية لخطية البروتينات وإضفاء شحنة سالبة موحدة.
قم بتحميل العينة على هلام الرحلان الكهربائي وافصل البروتينات إلى نطاقات ، مما يؤكد وجود الركام.
باستخدام مجال كهربائي ، انقل البروتينات المنفصلة إلى غشاء.
احتضان الغشاء في محلول مانع لإخفاء مواقع الربط غير المحددة.
احتضان الأجسام المضادة الموسومة بإنزيم البيروكسيداز ، والتي ترتبط على وجه التحديد بمجاميع البريون.
اغسل الغشاء لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة، وتقليل الإشارات غير المحددة.
أضف ركيزة كيميائية وعامل مؤكسد ، مما يمكن البيروكسيديز من أكسدة الركيزة وإنتاج الضوء.
قم بقياس شدة الضوء لتحديد كمية البريونات غير المطوية في المتجانس.