JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:22 د • March 4th, 2025
ابدأ بأنسجة المخ البشري في محلول التحلل.
تجانس الأنسجة باستخدام الخالط لإطلاق البروتينات ، بما في ذلك ديكاربوكسيلاز حمض الجلوتاميك ، أو الأشكال الإسوية لإنزيم GAD ، الضرورية لوظائف المخ.
احتضان المتجانس على الجليد ، ثم جهاز الطرد المركزي لحبيبات الحطام. اجمع المادة الطافية المحتوية على البروتين.
أضف مخزن تخزين يحتوي على منظف وعامل اختزال لتشويه طبيعة البروتينات.
قم بتحميل هذه العينة وعلامة جزيئية على جل SDS-PAGE المتدرج والكهربية لفصل البروتينات إلى نطاقات مميزة.
قم بمسح البروتينات من الجل بالكهرباء على ورقة غشائية.
أضف عامل حظر لمنع الربط غير المحدد.
احتضان الأجسام المضادة الأولية الخاصة ب GAD التي ترتبط بالأشكال الإسوية المستقبلة ل GAD.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
احتضان بالأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلورسنت.
اغسل مرة أخرى وتصور نطاقات البروتين على نظام التصوير.
الكشف عن نطاقات GAD من خلال التألق وتأكيد اختلافات الوزن الجزيئي باستخدام العلامة.