تقنية تلطيخ الذهب لتصور تقليل المايلين في الفئران المجهدة

خذ دماغا ثابتا كيميائيا من فأر يتعرض للإجهاد المزمن.

يضعف الإجهاد وظيفة الخلايا قليلة التغصن ، مما يعطل غمد المايلين الغني بالدهون المحيط بالمحاور العصبية في قشرة الفص الجبهي الإنسي ، وهي منطقة دماغية تنظم العاطفة.

أعد تطبيق المثبت للحفاظ على بنية الأنسجة. اغمر الأنسجة في مادة واقية من التبريد لتحل محل الماء ، مما يمنع تكون بلورات الثلج أثناء التجميد.

قم بتجميد الدماغ ، ثم قسمه إلى شرائح إكليلية.

قم بتركيب الشرائح على الشرائح ، ثم أعد ترطيبها في الماء لتعزيز تغلغل البقع.

سخني الشرائح في محلول يحتوي على أيونات الذهب. ترتبط هذه الأيونات بشكل انتقائي بالدهون الموجودة في غمد المايلين وتشكل رواسب ذهبية معدنية ، مما يضع علامة على الخلايا العصبية النخاعي.

سخنيها بعامل اختزال لتقليل أيونات الذهب الزائدة ، ثم اشطفها لإزالتها وتجفيف الأنسجة باستخدام زيادة تركيزات الكحول.

استخدم الزيلين لزيادة شفافية الأنسجة وتركيب الشرائح.

باستخدام الفحص المجهري ، تصور الخلايا العصبية النخاعية الملطخة بالذهب وتقييم التغيرات الناجمة عن الإجهاد.