ما هو الغرض من مصفوفة الخلايا الصغيرة؟

يُستخدم مصفوفة الخلايا الصغيرة لعزل وزراعة مستعمرات بكتيرية فردية.

كيف يدعم الهايدروجيل نمو البكتيريا؟

يوفر الهايدروجيل بيئة مستقرة تحتفظ بالرطوبة والمغذيات للبكتيريا.

ما هو دور المضادات الحيوية في هذه الطريقة؟

تمنع المضادات الحيوية التلوث أثناء نمو مستعمرات البكتيريا.

كيف يتم استخراج المستعمرات البكتيرية؟

يتم استخراج المستعمرات عن طريق تعريض الهايدروجيل للضوء فوق البنفسجي، مما يؤدي إلى تحلل الوصلات الرابطة.

ما هي التطبيقات المحتملة لهذه التقنية؟

يمكن استخدام هذه الطريقة للفحص عالي الإنتاجية ودراسة التفاعلات البكتيرية.

عزل المستعمرات البكتيرية القائم على الهيدروجيل القابل للتحلل الضوئي في مصفوفات Microwell

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 views • 2:25 min • August 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بمجموعة ميكروويل مطلية بطبقة خاملة عبر سطحها المسطح.

أضف تعليقا للخلايا البكتيرية على المصفوفة ، مما يسمح لها بالاستقرار في الآبار.

انزع الطلاء لإزالة الخلايا المرتبطة بالسطح ، مع الاحتفاظ بالخلايا الموضعية داخل الآبار.

بعد ذلك ، قم بتأمين مجموعة microwell بين الفواصل.

خذ شريحة بطبقة غير لاصقة وقم بإيداع محلول سلائف هيدروجيل يحتوي على بوليمر اصطناعي ورابط متشابك مذاب في مخزن مؤقت عليه.

اقلب الشريحة على المصفوفة واحتضنها. يتفاعل الرابط المتقاطع مع البوليمر لتشكيل هيدروجيل مسامي يحبس الخلايا.

قم بإزالة الشريحة وضع المصفوفة في وسط يدعم نمو البكتيريا ويحتوي على مضادات حيوية لمنع التلوث.

تتكاثر البكتيريا المحصورة في مستعمرات متميزة مكانيا.

يحتوي الهيدروجيل على روابط متقاطعة قابلة للتحلل الضوئي تنكسر عند التعرض للأشعة فوق البنفسجية ، مما يتيح تحلل الهيدروجيل المستهدف للاستخراج الانتقائي للمستعمرات البكتيرية.

قم ببذور 700 ميكرولتر من معلقات الخلايا البكتيرية مع OD 600 من 0.1 فوق ركيزة مصفوفة microwell وصنع محلول سلائف الهيدروجيل كما هو موضح سابقا باستخدام 12.5 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات ATGN من درجة الحموضة ثمانية. ماصة 12.5 ميكرولتر من محلول السلائف على شريحة زجاجية مشبعة بالفلور غير متفاعلة وضع فواصل فولاذية 38 ميكرومتر على جانبين متقابلين من ركيزة مصفوفة microwell المملوءة بالخلايا. ثم اقلب الشريحة الزجاجية المشبعة بالفلور مع قطرة محلول السلائف وضع قطرة في منتصف ركيزة الميكروويل.

عندما يتم تشكيل الهيدروجيل بعد حضانة لمدة 25 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، قم بإزالة الشريحة الزجاجية برفق من ركيزة microwell وضع الركيزة في طبق بتري يحتوي على وسائط ATGN مكملة بالمضادات الحيوية.