فصل أجزاء الغشاء الداخلي والخارجي للبكتيريا سالبة الجرام

ابدأ بالجزء الغشائي الكلي للبكتيريا سالبة الجرام ، بما في ذلك حويصلات الغشاء الداخلية والخارجية ، المعلقة في سكروز منخفض الكثافة يحافظ على السلامة الهيكلية.

لفصل الحويصلات الغشائية ، أضف بالتسلسل محاليل السكروز عالية الكثافة ومتوسطة الكثافة في أنبوب الطرد المركزي الفائق.

بعد ذلك ، أضف جزء الغشاء والسكروز منخفض الكثافة لإنشاء تدرج سكروز متقطع.

جهاز طرد مركزي فائق لفصل الحويصلات بناء على كثافتها.

تشكل حويصلات الغشاء الداخلي الأقل كثافة طبقة في الأعلى.

تشكل

حويصلات الغشاء الخارجي الأكثر كثافة ، الغنية بعديدات السكاريد الدهنية والبروتينات ، شريطا عند واجهة محاليل السكروز المتوسطة والعالية الكثافة.

اجمع طبقة الغشاء الداخلية وتخلص من محلول التدرج ، مع ترك كمية صغيرة.

ثم اجمع طبقة الغشاء الخارجي.

أضف مخزن تخزين مؤقت لكل كسر للتثبيت.

جهاز طرد مركزي لفصل الحويصلات وإزالة المادة الطافية.

أعد تعليق حويصلات الغشاء النقية ، وتجانسها ، وتخزينها في درجات حرارة منخفضة لمزيد من التحليل.

لتحضير تدرج السكروز ، أمسك أنبوب بولي بروبيلين أو أنبوب مفتوح فائق الوضوح في وضع مائل قليلا.

أضف ببطء ملليلترين من محلول السكروز عالي الكثافة. ثم أضف أربعة ملليلتر من محلول السكروز منخفض الكثافة. عند تحضير تدرج الكثافة ، أضف محلول السكروز ببطء لتجنب خلط الطبقات.

يجب أن تكون طبقات السكروز مرئية قليلا وتظهر محددة بشكل عام. بعد ذلك