فحص تكاثر الفيلقية الرئوية في البلاعم المعالجة مسبقا بحويصلات الغشاء الخارجي

ابدأ بصيحة متعددة الآبار تحتوي على ضامة معالجة مسبقا معرضة لحويصلات الغشاء الخارجي البكتيرية الفيلقية الرئوية أو OMVs.

أضف الفيلقية الرئوية بنسبة خلية بكتيريا إلى مضيفة محددة لإصابة الضامة المعالجة ب OMV.

أثناء الحضانة ، تستوعب البلاعم البكتيريا داخل البلعمات المرتبطة بالغشاء.

تعمل

المعالجة المسبقة ل OMV على تغيير إشارات البلاعم ، مما يثبط نضوج البلعمة.

هذا يسهل تكوين فجوة تحتوي على الفيلقية ، والتي تحمي البكتيريا وتسمح بالتكاثر داخل الخلايا.

أضف منظفا واحتضانه لتحلل البلاعم. هذا يطلق البكتيريا داخل الخلايا في الوسط.

ضع المحللة المخففة على طبق أجار غني بالمغذيات.

أثناء الحضانة ، تنمو البكتيريا وتشكل مستعمرات مرئية.

عد المستعمرات لتحديد الوحدات المكونة للمستعمرة ، أو CFUs ، التي تمثل عدد البكتيريا القابلة للحياة.

قارن بين عدد CFU بين الضامة المعالجة ب OMV وغير المعالجة.

يشير ارتفاع CFU في OMV المعالج مقارنة بالضامة غير المعالجة إلى أن OMVs تسهل بقاء الفيلقية داخل الضامة.

لإصابة خلايا THP-1 المعالجة مسبقا أو غير المعالجة بسلالة L.pneumophila من النوع البري أو خلايا BMDM الأساسية من الفئران مع طفرة تفتقر إلى السوط من هذه السلالة دون تغيير الوسط من الخلايا.

أضف البكتيريا في وزارة الداخلية 0.5 والتي تصل إلى واحد في 10 إلى L.pneumophila الخامس لكل بئر. احتضان الثقافات لمدة 24 و 48 ساعة على التوالي. لتحلل الخلايا ، أضف الصابونين بتركيز نهائي قدره 0.1٪ واحتضان الخلايا لمدة خمس دقائق.

ثم قم بوضع 50 ميكرولترا من التخفيفات المطلوبة على ألواح BCYE أجار واحتضان الألواح لمدة ثلاثة أيام.

عد المستعمرات المشكلة بصريا بالعين وقم بإجراء العمليات الحسابية وفقا لبروتوكول النص.