موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:30 دقيقة • August 29th, 2025
خذ محللة خلية بكتيرية تحتوي على مكونات خلوية ، بما في ذلك الحمض النووي الريبي المرسال الموسومة MS2 المرتبط بالحمض النووي الريبي المستهدف.
الحمض النووي الريبي المسموم بعلامة MS2 هو حمض مضمض رمسال تنظيمي صغير مصمم هندسيا يحمل حلقة جذعية MS2 aptamer في نهايته 5 ، والتي تظهر تقاربا عاليا مع بروتين الغلاف الفيروسي MS2.
انقل المحللة البكتيرية إلى عمود كروماتوغرافيا تقارب متوازن مسبقا يحتوي على راتنج الأميليوز المرتبط ببروتينات الاندماج المكونة من بروتين ربط المالتوز (MBP) وبروتين طبقة MS2.
يلتقط بروتين طبقة MS2 الثابت على وجه التحديد الحلقة الجذعية للأبتامر ل sRNA الموسوم بعلامة MS2 ، مع الاحتفاظ بالرنا المرسال المستهدف السليم المرتبط بالحمض النووي الريبي.
يتم جمع الجزيئات غير الموسومة التي تظل غير مرتبطة في التدفق.
اغسل العمود بمخزن مؤقت لإزالة الجزيئات المتبقية غير المرتبطة.
Elute مع مخزن مؤقت يحتوي على المالتوز ، والذي يزيح MBP من الراتنج ، مما يطلق الحمض النووي الريبي المسموق بعلامة MS2 المرتبط بالحمض النووي الريبي المستهدف.
اجمع الكسور وخزنها على الجليد للحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبي لتحليلها في اتجاه المصب.
قم بإزالة طرف العمود ، ثم ضع عمودا كروماتوغرافيا في رف عمود واغسل العمود بالماء فائق النقاء. أضف 300 ميكرولتر من راتنج الأميليوز واغسل العمود ب 10 مل من العازلة A.خفف 1 ، 200 بيكا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية