موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:25 دقيقة • August 29th, 2025
ابدأ بالسلالات البكتيرية المسببة للأمراض المزروعة على ألواح أجار منفصلة.
تحمل كل سلالة طفرات مختلفة في الجينات المسؤولة عن إنتاج كبسولة ، وهي طبقة واقية من عديد السكاريد.
انقل المستعمرات المفردة من الصفائح إلى أنابيب منفصلة تحتوي على وسط سائل غني بالمغذيات واحتضانه.
أثناء الحضانة ، تدخل البكتيريا مرحلة النمو الأسي وتعبر عن الجينات المنتجة للكبسولة.
تؤدي الطفرات في هذه الجينات إلى اختلافات في إنتاج الكبسولات ، مما يؤدي إلى توليد خلايا غير مكبسولة ، ومكسوفة بشكل ضعيف ، وكبسولات بشدة.
نقل الثقافات وأجهزة الطرد المركزي لحبيبات الخلايا.
تشكل الخلايا غير المكسوة والضعيفة الكبسولات كريات كثيفة ، بينما تشكل الخلايا ذات الكبسولات الشديدة ،
بسبب طبقة الكبسولة الرطبة ، حبيبات أقل كثافة.
قم بإزالة المادة الطافية بعناية لتجنب فقدان الخلايا ذات الكبسولات الثقيلة.
أضف عازلة ، وجهاز طرد مركزي مرة أخرى ، وتخلص من المادة الطافية للتخلص من الوسط المتبقي.
أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت لتثبيت البكتيريا دون تعزيز المزيد من النمو ، وبالتالي الحفاظ على بنية الكبسولة.
حدد مستعمرة واحدة من لوحة مخزون بحلقة معقمة ، وقم بتلقيح 10 مل من المرق المناسب.
احتضان الثقافة بين عشية وضحاها. ثم انقل المزرعة إلى أنبوب سعة 15 مليلتر وجهاز طرد مركزي. بعد ذلك ، تخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في ملليلترين من PBS.
كرر الطرد المركزي ، وتخلص من المادة الطافية الناتجة. ثم أعد تعليق الحبيبات في ملليلترين من PBS.