موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:17 دقيقة • August 29th, 2025
ابدأ بأنبوب يحتوي على تدرج كثافة متقطع محدد مسبقا ، محضر باستخدام جزيئات السيليكا الغروية غير السامة المطلية بالبولي فينيل بيروليدون.
يتكون التدرج من ثلاث طبقات غير متداخلة مرتبة بترتيب زيادة الكثافات من أعلى إلى أسفل.
خذ مكتبة متحولة للينقولات البكتيرية ، وهي عبارة عن تعليق مجمع للسلالات البكتيرية مع طفرات عشوائية ناتجة عن الينقولات.
تعطل مجموعة فرعية من هذه الطفرات الجينات التي تنظم الكبسولة ، وهي طبقة عديد السكاريد المحيطة بجدار الخلية البكتيرية ، مما يؤدي إلى سلالات بكميات متفاوتة من الكبسولات.
أضف مكتبة البكتيريا إلى الجزء العلوي من التدرج ببطء شديد ، دون خلط الواجهة.
الطرد المركزي الأنبوب بسرعة معتدلة.
يسهل التدرج الهجرة التفاضلية للبكتيريا بناء على كميات كبسولاتها.
السلالات شديدة الكبسولات ، كونها أقل كثافة بسبب طبقة السكريات الرطبة ، تتموضع بالقرب من الجزء العلوي.
تستقر السلالات ذات الكبسولات الضعيفة في المنتصف ، وتهاجر السلالات غير المكسولة والأكثر كثافة إلى القاع.
السلالات البكتيرية المنفصلة جاهزة للتحليل النهائي.
أضف بعناية 600 ميكرولتر من الخلايا المحضرة إلى الجزء العلوي من التدرج في الأنبوب. ثم ضع الأنبوب في محول أنبوبي ، وقم بوزن الأنبوب بالمحول لضمان التوازن. بعد ذلك ، ضع محول الأنبوب في دوار بزاوية ثابتة داخل جهاز طرد مركزي أعلى الطاولة ، وقم بجهاز الطرد المركزي للأنبوب لمدة 30 دقيقة عند 3 ، 000 جم.
أخيرا ، بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنبوب بعناية ، وضعه في رف ، وقم بتصوير النتائج.