موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:37 دقيقة • August 29th, 2025
خذ مستعمرات بكتيرية محولة بلازميد يحتوي على جين محفز.
اختر مستعمرة واحدة لتلقيح الوسائط السائلة الطازجة.
احتضان مع الاهتزاز للأكسجين ونمو البكتيريا المتجانسة.
استخدم عينة مزرعة مخففة لقياس الامتصاص وتقدير كثافة الخلايا.
خذ لوحة بئر ذات جدران سوداء ذات قاع زجاجي لمنع الحديث المتبادل الخفيف بين العينات ، مما يضمن القياس الكمي الدقيق للتلألؤ.
أضف المزرعة البكتيرية بتركيز الخلية المطلوب في الآبار.
أضف مضادا حيويا للحفاظ على احتباس البلازميد.
أضف محفز لبدء التعبير الجيني.
يقوم الجين بتشفير إنزيم يتفاعل مع بروتين بكتيري معين لإنتاج الضوء ، مما يمنح البكتيريا خصائص مضيئة بيولوجيا.
ضع غطاءا على اللوحة لمنع التبخر قبل وضعه في قارئ لوحة يتم التحكم في درجة حرارته مع وضع الاهتزاز المستمر.
على فترات منتظمة ، سجل الامتصاص لقياس عدد الخلية وشدة الضوء لمراقبة التلألؤ البيولوجي. ربط كثافة الخلية بالتلألؤ البيولوجي.
تلقيح 3 مل من الوسط بمستعمرة واحدة من الصفيحة الليلية ، واحتضان الخلايا عند 28 درجة مئوية و 180 دورة في الدقيقة لمدة ساعة إلى ساعتين تقريبا.
قم بقياس كثافة الخلية لتخفيف من واحد إلى عشرة للثقافة السائلة عند 650 نانومتر. ثم احسب نسبة وحجم مليلتر واحد من الثقافة ب OD650 0.05. الماصة الحجم المحسوب للثقافة والوسط في صفيحة سوداء الجدران 24 بئر مع قاع زجاجي.
للتأكد من أن متجه pET28a الذي يحتوي على أوبرون ل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية