JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 3:26 د • August 29th, 2025
Magnetospirillum هي بكتيريا متحركة تزدهر في الأكسجين المنخفض.
إنهم ينتجون بلورات نانوية مغناطيسية تعمل كثنائيات أقطاب مغناطيسية ، مما يساعدهم على التنقل في المجال المغنطيسي الأرضي نحو تركيز الأكسجين الأمثل.
لزراعة Magnetospirillum ، خذ وسائط سائلة خالية من الأكسجين. حقن حجم متحكم فيه من الأكسجين لتهيئة الظروف الهوائية الدقيقة وإضافة البكتيريا واحتضانها.
بمرور الوقت ، تزداد التعكر ، مما يشير إلى نمو البكتيريا.
لتحضير ثقافة شبه صلبة ، استخدم وسيطا يحتوي على مؤشر أكسجين وردي يصبح عديم اللون في منطقة الأكسجين المنخفض ، مما يشير إلى واجهة نقص الأكسجين (OAI) بتركيز الأكسجين الأمثل
.
تلقيح البكتيريا في OAI ، وأغلق الأنبوب ، واحتضانه.
تتكاثر البكتيريا لتشكل نطاقا يهاجر لأعلى مع استهلاك الأكسجين.
لتقييم السلوك المغناطيسي ، قم بإعداد قطرة معلقة من البكتيريا المستنبتة وضع مغناطيسا بالقرب منها.
تحت المجهر ، راقب السباحة الاتجاهية نحو المغناطيس وانعكاس الحركة عند قلب المغناطيس.
لتلقيح سلالات MSR-1 و AMB-1 و MS-1 في وسط سائل ، قم بإشعال قمم الأكسجين والزجاجات المتوسطة الطازجة عن طريق وضع الإيثانول على السدادات وتمريرها عبر لهب موقد بنسن.
باستخدام حقنة معقمة وإبرة ، استخرج ملليلتر واحد من الأكسجين من زجاجة الأكسجين وانقله إلى الزجاجة المتوسطة الطازجة. في حالة استخدام اللقاح من مزرعة أخرى نمت في زجاجة زجاجية ، قم بإشعال كلتا الزجاجتين. ثم قم بتلقيح مليلتر واحد من الثقافة القديمة في الوسط الطازج.
احتضان المزرعة عند 32 درجة مئوية ، وقم بتلقيحها في وسط جديد بعد أربعة إلى سبعة أيام. لتلقيح MSR-1 في تدرج الأكسجين ، وسط شبه صلب ، تحقق من أن أنبوب الوسط الطازج يعرض OAI محددا جيدا ، يتجسد بواسطة واجهة وردية إلى عديمة اللون على بعد حوالي سنتيمتر إلى ثلاثة سنتيمترات تحت سطح الوسط. إذا كان اللقاح قادما من مزرعة شبه صلبة أخرى لتركيز الأكسجين ، فقم بحصاد البكتيريا عن طريق شفط 50 ميكرولترا من المزرعة بطرف ماصة معقمة يوضع على الشريط الذي تتكون منه البكتيريا.
تلقيح هذه البكتيريا ببطء في OAI في الوسط الطازج ، وتجنب إزعاج الواجهة. أغلق الأنبوب واترك البكتيريا تنمو بين 25 درجة مئوية و 30 درجة مئوية. للتأكد من أن البكتيريا مغناطيسية ومشروطة ، ضع قطرة من المزرعة على زلة غطاء المجهر.
اقلب زلة الغطاء ، وقم بتثبيتها على حلقة O ترتكز على شريحة زجاجية. تأكد من أن القطرة لا تلمس الشريحة السفلية. ضع القطرة المعلقة تحت المجهر وركز على حافة القطرة.
ضع القطب الجنوبي للمغناطيس بالقرب من تلك الحافة ، وشاهد البكتيريا تسبح نحو الحافة. اقلب المغناطيس لجعلهم يسبحون في الاتجاه المعاكس.